Разлика между концентриран гел и разделителен гел
Стойността на рН на концентрирания гел е различна от тази на разделителния гел.Първият показва основно ефект на концентрация, докато вторият показва ефект на заряд и ефект на молекулярно сито.Концентрационният ефект се завършва главно в концентрирания гел.pH на концентрирания гел е 6,8.При това състояние на pH, почти всички Cl йони на HCl в буфера се дисоциират и изоелектричната точка на Gly е 6,0.Само няколко са дисоциирани на отрицателни йони, които се движат много бавно в електрическото поле.Киселинните протеини се дисоциират на отрицателни йони при това pH и скоростта на миграция на трите вида йони е cl > Общи протеини > Gly.След като електрофорезата започне, Cl йони се движат бързо, оставяйки област с ниска йонна концентрация след себе си.Gly се движи много бавно в електрическото поле, което води до липса на движещи се йони, така че между бързите и бавните йони се образува област с високо напрежение без йони.Всички отрицателни йони в зоната с високо напрежение ще ускорят своето движение.Когато се преместят в областта на Cl йон, високото напрежение изчезва и скоростта на движение на протеина се забавя.След установяване на горното стабилно състояние, протеиновата проба се концентрира между бързи и бавни йони, за да се образува тесен междинен слой, който се подрежда в ивици според количеството на отрицателния заряд, пренасян от протеина.След като концентрираната проба влезе в гела за разделяне от концентрирания гел, pH на гела се повишава, степента на дисоциация на Gly се увеличава и подвижността се повишава.Освен това, тъй като молекулата му е малка, той надхвърля всички протеинови молекули.Веднага след мигрирането на Cl йони, ниската концентрация на йони вече не съществува, образувайки постоянна сила на електрическото поле.Следователно, разделянето на протеинови проби в сепарационния гел зависи главно от свойствата на заряда, размера на молекулата и формата.Размерът на порите на разделителния гел има определен размер.За протеини с различна относителна маса хистерезисният ефект, получен при преминаване, е различен.Дори частици с еднакви статични заряди ще отделят протеини с различни размери един от друг поради ефекта на това молекулярно сито.
Разлика между 10% и 12% разделително лепило
Според молекулното тегло на вашия целеви протеин, ако това е протеин с по-голямо молекулно тегло (над 60KD), можете да използвате 10% лепило, ако това е протеин с молекулно тегло между 60 и 30kD, можете да използвате 12 % лепило, а ако е по-ниско от 30kd, обикновено използвам 15% лепило.Основният момент е, че когато линията на индикатора току-що излезе от гуменото дъно, вашият целеви протеин може да бъде точно в средата на гумата.
Размерът на порите на гела, съответстващ на различните концентрации на гела, също е различен.Размерът на порите с малка концентрация е голям, а размерът на порите с голяма концентрация е малък.Обикновено гелът за разделяне е 12%, а концентрираният гел е 5%, тъй като целта на концентрирания гел е да концентрира всички протеини на една и съща начална линия и след това да влезе в гела за разделяне за разделяне.В зависимост от размера на протеина.
Време на публикуване: 05 септември 2022 г
