Perbedaan antara gel pekat dan gel pemisah
Nilai pH gel pekat berbeda dengan gel pemisah.Yang pertama terutama menunjukkan efek konsentrasi, sedangkan yang terakhir menunjukkan efek muatan dan efek saringan molekuler.Efek konsentrasi terutama diselesaikan dalam gel pekat.PH gel pekat adalah 6,8.Pada kondisi pH ini, hampir semua ion Cl dari HCl dalam buffer terdisosiasi, dan titik isoelektrik Gly adalah 6,0.Hanya sedikit yang terdisosiasi menjadi ion negatif, yang bergerak sangat lambat dalam medan listrik.Protein asam dipisahkan menjadi ion negatif pada pH ini, dan laju migrasi ketiga jenis ion tersebut adalah cl > Protein umum > Gly.Setelah elektroforesis dimulai, ion Cl bergerak cepat, meninggalkan area konsentrasi ion rendah.Gly bergerak sangat lambat di medan listrik, mengakibatkan kurangnya ion yang bergerak, sehingga daerah tegangan tinggi yang kekurangan ion terbentuk antara ion cepat dan lambat.Semua ion negatif di daerah tegangan tinggi akan mempercepat pergerakannya.Ketika mereka pindah ke wilayah ion Cl, tegangan tinggi menghilang, dan kecepatan gerak protein melambat.Setelah keadaan stabil di atas terbentuk, sampel protein dipekatkan antara ion cepat dan lambat untuk membentuk interlayer yang sempit, tersusun menjadi pita sesuai dengan jumlah muatan negatif yang dibawa oleh protein.Setelah sampel pekat memasuki gel pemisah dari gel pekat, pH gel naik, derajat disosiasi Gly naik, dan mobilitas naik.Selain itu, karena molekulnya kecil, ia melebihi semua molekul protein.Segera setelah ion Cl bermigrasi, konsentrasi ion rendah tidak ada lagi, membentuk kekuatan medan listrik yang konstan.Oleh karena itu, Pemisahan sampel protein dalam gel pemisahan terutama bergantung pada sifat muatannya, ukuran dan bentuk molekulnya.Ukuran pori dari gel pemisah memiliki ukuran tertentu.Untuk protein dengan massa relatif berbeda, efek histeresis yang diterima saat lewat berbeda.Bahkan partikel dengan muatan statis yang sama akan memisahkan protein dengan ukuran berbeda satu sama lain karena efek saringan molekuler ini.
Selisih antara 10% dan 12% lem pemisah
Menurut berat molekul protein target Anda, jika itu adalah protein dengan berat molekul lebih besar (di atas 60kD), Anda dapat menggunakan lem 10%, jika itu adalah protein dengan berat molekul antara 60 dan 30kd, Anda dapat menggunakan 12 % lem, dan jika lebih rendah dari 30kd, saya biasanya menggunakan lem 15%.Poin utamanya adalah ketika garis indikator baru saja habis dari bagian bawah karet, protein target Anda bisa berada tepat di tengah karet.
Ukuran pori gel yang sesuai dengan konsentrasi gel yang berbeda juga berbeda.Ukuran pori dengan konsentrasi kecil besar, dan ukuran pori dengan konsentrasi besar kecil.Umumnya, gel pemisah adalah 12% dan gel pekat adalah 5%, karena tujuan gel pekat adalah untuk memusatkan semua protein pada garis awal yang sama, dan kemudian memasukkan gel pemisah untuk pemisahan.Tergantung ukuran proteinnya.
Waktu posting: Sep-05-2022
