Diferenza entre xel concentrado e xel de separación
O valor de pH do xel concentrado é diferente do do xel de separación.O primeiro mostra principalmente un efecto de concentración, mentres que o segundo mostra un efecto de carga e un efecto de criba molecular.O efecto de concentración complétase principalmente no xel concentrado.O pH do xel concentrado é 6,8.Baixo esta condición de pH, case todos os ións Cl do HCl do tampón están disociados e o punto isoeléctrico de Gly é 6,0.Só uns poucos están disociados en ións negativos, que se moven moi lentamente no campo eléctrico.As proteínas ácidas disocian en ións negativos a este pH, e a taxa de migración dos tres tipos de ións é cl > Proteínas xerais > Gly.Despois de que comeza a electroforese, os ións Cl móvense rapidamente, deixando atrás unha área de baixa concentración de ións.Gly móvese moi lentamente no campo eléctrico, o que provoca a falta de ións en movemento, polo que se forma unha rexión de alta tensión que carece de ións entre ións rápidos e lentos.Todos os ións negativos da rexión de alta tensión acelerarán o seu movemento.Cando se desprazan á rexión do ión Cl, a alta tensión desaparece e a velocidade de movemento da proteína diminúe.Despois de establecer o estado estable anterior, a mostra de proteína concéntrase entre ións rápidos e lentos para formar unha capa intermedia estreita, organízase en bandas segundo a cantidade de carga negativa que leva a proteína.Despois de que a mostra concentrada entra no xel de separación do xel concentrado, o pH do xel aumenta, o grao de disociación de Gly aumenta e a mobilidade aumenta.Ademais, debido a que a súa molécula é pequena, supera todas as proteínas.Inmediatamente despois da migración dos ións Cl, a baixa concentración de ións xa non existe, formando unha intensidade de campo eléctrico constante.Polo tanto, a separación de mostras de proteínas no xel de separación depende principalmente das súas propiedades de carga, tamaño molecular e forma.O tamaño dos poros do xel de separación ten un tamaño determinado.Para proteínas con masa relativa diferente, o efecto de histérese recibido ao pasar é diferente.Mesmo partículas con cargas estáticas iguais separarán proteínas de diferentes tamaños entre si debido ao efecto desta peneira molecular.
Diferenza entre 10% e 12% de cola separadora
Segundo o peso molecular da súa proteína obxectivo, se é unha proteína cun peso molecular maior (superior a 60 kD), pode usar cola do 10 %, se é unha proteína cun peso molecular entre 60 e 30 kd, pode usar 12 % de cola, e se é inferior a 30 kd, adoito usar un 15 % de cola.O punto principal é que cando a liña indicadora acaba de saír do fondo de goma, a proteína obxectivo pode estar xusto no medio da goma.
O tamaño dos poros do xel correspondente a diferentes concentracións de xel tamén é diferente.O tamaño dos poros con pequena concentración é grande e o tamaño dos poros con gran concentración é pequeno.Xeralmente, o xel de separación é do 12% e o xel concentrado é do 5%, porque o propósito do xel concentrado é concentrar todas as proteínas na mesma liña de partida e, a continuación, introducir o xel de separación para a separación.Dependendo do tamaño da proteína.
Hora de publicación: 05-09-2022
