ההבדל בין ג'ל מרוכז לג'ל הפרדה

ההבדל בין ג'ל מרוכז לג'ל הפרדה

ערך ה-pH של הג'ל המרוכז שונה מזה של ג'ל ההפרדה.הראשון מציג בעיקר אפקט ריכוז, בעוד האחרון מציג אפקט מטען ואפקט מסננת מולקולרית.אפקט הריכוז מושלם בעיקר בג'ל המרוכז.ה-pH של הג'ל המרוכז הוא 6.8.בתנאי pH זה, כמעט כל יוני Cl של HCl במאגר מתנתקים, והנקודה האיזואלקטרית של Gly היא 6.0.רק מעטים מפורקים ליונים שליליים, הנעים לאט מאוד בשדה החשמלי.חלבונים חומציים מתפרקים ליונים שליליים ב-pH זה, וקצב הנדידה של שלושת סוגי היונים הוא cl > חלבונים כלליים > Gly.לאחר תחילת האלקטרופורזה, יוני Cl נעים במהירות, ומשאירים מאחור אזור ריכוז יונים נמוך.Gly נע לאט מאוד בשדה החשמלי, וכתוצאה מכך מחסור ביונים נעים, ולכן נוצר אזור מתח גבוה חסר יונים בין יונים מהירים לאיטיים.כל היונים השליליים באזור המתח הגבוה יאיץ את תנועתם.כאשר הם עוברים לאזור יוני Cl, המתח הגבוה נעלם, ומהירות התנועה של החלבון מואטת.לאחר הקמת המצב היציב לעיל, דגימת החלבון מתרכזת בין יונים מהירים ואיטיים ליצירת שכבת ביניים צרה, היא מסודרת לרצועות בהתאם לכמות המטען השלילי שנושא החלבון.לאחר שהדגימה המרוכזת נכנסת לג'ל ההפרדה מהג'ל המרוכז, ה-pH של הג'ל עולה, דרגת הדיסוציאציה של Gly עולה, והניידות עולה.יתרה מכך, מכיוון שהמולקולה שלו קטנה, היא עולה על כל מולקולות החלבון.מיד לאחר נדידת יוני Cl, ריכוז היונים הנמוך אינו קיים יותר, ויוצרים חוזק שדה חשמלי קבוע.לכן, ההפרדה של דגימות חלבון בג'ל ההפרדה תלויה בעיקר בתכונות המטען שלו, בגודל המולקולרי ובצורתו.לגודל הנקבוביות של ג'ל ההפרדה יש ​​גודל מסוים.עבור חלבונים בעלי מסה יחסית שונה, אפקט ההיסטרזיס המתקבל בעת המעבר שונה.אפילו חלקיקים בעלי מטענים סטטיים שווים יפרידו בין חלבונים בגדלים שונים זה מזה בגלל השפעתה של מסננת מולקולרית זו.