Razlika između koncentriranog gela i gela za odvajanje
pH vrijednost koncentriranog gela se razlikuje od pH vrijednosti gela za odvajanje.Prvi uglavnom pokazuje efekat koncentracije, dok drugi pokazuje efekat naelektrisanja i efekat molekularnog sita.Efekat koncentracije uglavnom se dovršava u koncentrovanom gelu.pH koncentrovanog gela je 6,8.Pod ovim pH uslovima, skoro svi Cl ioni HCl u puferu su disocirani, a izoelektrična tačka Gly je 6,0.Samo nekoliko je disocirano na negativne ione, koji se kreću vrlo sporo u električnom polju.Kiseli proteini se pri ovom pH disociraju u negativne jone, a brzina migracije tri tipa jona je cl > Opšti proteini > Gly.Nakon početka elektroforeze, Cl ioni se brzo kreću, ostavljajući za sobom područje niske koncentracije iona.Gly se kreće vrlo sporo u električnom polju, što rezultira nedostatkom pokretnih jona, pa se između brzih i sporih jona formira visokonaponsko područje bez iona.Svi negativni ioni u visokonaponskom području će ubrzati svoje kretanje.Kada se pomaknu u područje Cl jona, visoki napon nestaje, a brzina kretanja proteina se usporava.Nakon što se uspostavi gore navedeno stabilno stanje, uzorak proteina se koncentriše između brzih i sporih jona kako bi se formirao uski međusloj. Raspoređuje se u trake prema količini negativnog naboja koji nosi protein.Nakon što koncentrirani uzorak uđe u gel za odvajanje od koncentriranog gela, pH gela raste, stepen disocijacije Gly se povećava, a pokretljivost raste.Štaviše, budući da je njegova molekula mala, ona premašuje sve molekule proteina.Neposredno nakon što Cl ioni migriraju, niska koncentracija jona više ne postoji, formirajući konstantnu jačinu električnog polja.Stoga, odvajanje uzoraka proteina u separacijskom gelu uglavnom ovisi o njegovim svojstvima naboja, veličini i obliku molekula.Veličina pora gela za odvajanje ima određenu veličinu.Za proteine različite relativne mase, efekat histereze koji se dobija prilikom prolaska je različit.Čak i čestice sa jednakim statičkim nabojem će odvojiti proteine različitih veličina jedan od drugog zbog efekta ovog molekularnog sita.
Razlika između 10% i 12% odvajajućeg ljepila
Prema molekularnoj težini vašeg ciljnog proteina, ako se radi o proteinu veće molekularne težine (iznad 60KD), možete koristiti 10% ljepila, ako je u pitanju protein s molekulskom težinom između 60 i 30kd, možete koristiti 12 % ljepila, a ako je manji od 30kd obično koristim 15% ljepila.Glavna stvar je da kada indikatorska linija jednostavno ponestane gumenog dna, vaš ciljni protein može biti upravo u sredini gume.
Veličina pora gela koja odgovara različitim koncentracijama gela je također različita.Veličina pora sa malom koncentracijom je velika, a veličina pora sa velikom koncentracijom je mala.Općenito, gel za odvajanje je 12%, a koncentrirani gel je 5%, jer je svrha koncentriranog gela da koncentriše sve proteine na istoj početnoj liniji, a zatim uđe u gel za razdvajanje radi razdvajanja.Ovisno o veličini proteina.
Vrijeme objave: Sep-05-2022
