Rozdíl mezi koncentrovaným gelem a separačním gelem
Hodnota pH koncentrovaného gelu se liší od hodnoty pH separačního gelu.První vykazuje hlavně koncentrační účinek, zatímco druhý vykazuje nábojový účinek a účinek molekulového síta.Koncentrační efekt je završen především v koncentrovaném gelu.pH koncentrovaného gelu je 6,8.Za těchto podmínek pH jsou téměř všechny Cl ionty HCl v pufru disociovány a izoelektrický bod Gly je 6,0.Jen málo z nich je disociováno na záporné ionty, které se v elektrickém poli pohybují velmi pomalu.Kyselé proteiny jsou při tomto pH disociovány na negativní ionty a rychlost migrace těchto tří typů iontů je cl > Obecné proteiny > Gly.Po zahájení elektroforézy se ionty Cl rychle pohybují a zanechávají za sebou oblast s nízkou koncentrací iontů.Gly se v elektrickém poli pohybuje velmi pomalu, což má za následek nedostatek pohyblivých iontů, takže mezi rychlými a pomalými ionty vzniká vysokonapěťová oblast bez iontů.Všechny záporné ionty v oblasti vysokého napětí urychlí svůj pohyb.Když se přesunou do oblasti Cl iontů, vysoké napětí zmizí a rychlost pohybu proteinu se zpomalí.Po ustavení výše uvedeného stabilního stavu je vzorek proteinu koncentrován mezi rychlé a pomalé ionty za vzniku úzké mezivrstvy, která je uspořádána do pásů podle množství negativního náboje neseného proteinem.Poté, co koncentrovaný vzorek vstoupí do separačního gelu z koncentrovaného gelu, stoupne pH gelu, zvýší se stupeň disociace Gly a stoupne mobilita.Navíc, protože jeho molekula je malá, převyšuje všechny molekuly bílkovin.Ihned po migraci iontů Cl již nízká koncentrace iontů neexistuje a vytváří konstantní sílu elektrického pole.Separace proteinových vzorků v separačním gelu proto závisí především na jeho nábojových vlastnostech, velikosti molekul a tvaru.Velikost pórů separačního gelu má určitou velikost.Pro proteiny s různou relativní hmotností je účinek hystereze při průchodu odlišný.Dokonce i částice se stejným statickým nábojem oddělí proteiny různých velikostí od sebe díky účinku tohoto molekulárního síta.
Rozdíl mezi 10% a 12% separačního lepidla
Podle molekulové hmotnosti vašeho cílového proteinu, pokud se jedná o protein s větší molekulovou hmotností (nad 60 kD), můžete použít 10% lepidlo, pokud se jedná o protein s molekulovou hmotností mezi 60 a 30 kd, můžete použít 12 % lepidla, a pokud je nižší než 30 kd, obvykle používám 15 % lepidla.Hlavním bodem je, že když indikační čára právě vybíhá z gumového dna, váš cílový protein může být právě uprostřed gumy.
Velikost pórů gelu odpovídající různým koncentracím gelu je také odlišná.Velikost pórů s malou koncentrací je velká a velikost pórů s velkou koncentrací je malá.Obecně je separační gel 12 % a koncentrovaný gel 5 %, protože účelem koncentrovaného gelu je koncentrovat všechny proteiny na stejné startovací čáře a poté vstoupit do separačního gelu pro separaci.Podle velikosti proteinu.
Čas odeslání: září-05-2022
