Razlika između koncentriranog gela i gela za odvajanje
pH vrijednost koncentriranog gela razlikuje se od pH vrijednosti gela za odvajanje.Prvi uglavnom pokazuje učinak koncentracije, dok drugi pokazuje učinak naboja i učinak molekularnog sita.Učinak koncentracije uglavnom se postiže u koncentriranom gelu.pH koncentriranog gela je 6,8.Pod ovim pH uvjetima, gotovo svi Cl ioni HCl u puferu su disocirani, a izoelektrična točka Gly je 6,0.Samo nekoliko se disocira u negativne ione, koji se kreću vrlo sporo u električnom polju.Kiseli proteini disociraju u negativne ione pri ovom pH, a brzina migracije tri vrste iona je cl > Opći proteini > Gly.Nakon što elektroforeza započne, ioni Cl kreću se brzo ostavljajući za sobom područje niske koncentracije iona.Gly se kreće vrlo sporo u električnom polju, što rezultira nedostatkom pokretnih iona, tako da se između brzih i sporih iona formira područje visokog napona bez iona.Svi negativni ioni u području visokog napona ubrzat će svoje kretanje.Kada se pomaknu u područje iona Cl, visoki napon nestaje, a brzina kretanja proteina se usporava.Nakon što se uspostavi gore navedeno stabilno stanje, uzorak proteina se koncentrira između brzih i sporih iona kako bi se formirao uski međusloj. On se raspoređuje u trake prema količini negativnog naboja koji nosi protein.Nakon što koncentrirani uzorak uđe u gel za odvajanje od koncentriranog gela, pH gela raste, stupanj disocijacije Gly raste, a pokretljivost raste.Štoviše, budući da je njegova molekula mala, premašuje sve proteinske molekule.Neposredno nakon migracije iona Cl, niska koncentracija iona više ne postoji, stvarajući konstantnu jakost električnog polja.Stoga odvajanje uzoraka proteina u gelu za odvajanje uglavnom ovisi o svojstvima naboja, veličini i obliku molekule.Veličina pora gela za odvajanje ima određenu veličinu.Za proteine s različitom relativnom masom, učinak histereze dobiven pri prolasku je različit.Čak će i čestice s jednakim statičkim nabojem odvojiti proteine različitih veličina jedne od drugih zbog učinka ovog molekularnog sita.
Razlika između 10% i 12% razdjelnog ljepila
U skladu s molekularnom težinom vašeg ciljnog proteina, ako se radi o proteinu veće molekulske mase (iznad 60KD), možete koristiti 10% ljepila, ako se radi o proteinu s molekularnom težinom između 60 i 30kD, možete koristiti 12 % ljepila, a ako je niža od 30kd obično koristim 15% ljepila.Glavna poanta je da kada linija indikatora upravo istekne iz gumenog dna, vaš ciljani protein može biti upravo u sredini gume.
Veličina pora gela koja odgovara različitim koncentracijama gela također je različita.Veličina pora s malom koncentracijom je velika, a veličina pora s velikom koncentracijom je mala.Općenito, gel za odvajanje je 12%, a koncentrirani gel 5%, jer je svrha koncentriranog gela koncentrirati sve proteine na istoj početnoj liniji, a zatim ući u gel za odvajanje radi odvajanja.Ovisno o veličini proteina.
Vrijeme objave: 5. rujna 2022
