Unterschied zwischen konzentriertem Gel und Trenngel
Der pH-Wert des konzentrierten Gels unterscheidet sich von dem des Trenngels.Ersteres zeigt hauptsächlich einen Konzentrationseffekt, während letzteres einen Ladungseffekt und einen Molekularsiebeffekt zeigt.Der Konzentrationseffekt wird hauptsächlich im konzentrierten Gel vervollständigt.Der pH-Wert des konzentrierten Gels beträgt 6,8.Unter dieser pH-Bedingung werden fast alle Cl-Ionen von HCl im Puffer dissoziiert und der isoelektrische Punkt von Gly beträgt 6,0.Nur wenige werden in negative Ionen dissoziiert, die sich im elektrischen Feld sehr langsam bewegen.Saure Proteine werden bei diesem pH-Wert in negative Ionen dissoziiert, und die Migrationsgeschwindigkeit der drei Arten von Ionen beträgt cl > Allgemeine Proteine > Gly.Nach Beginn der Elektrophorese bewegen sich die Cl-Ionen schnell und hinterlassen einen Bereich mit niedriger Ionenkonzentration.Gly bewegt sich im elektrischen Feld sehr langsam, was dazu führt, dass es keine beweglichen Ionen gibt, sodass zwischen schnellen und langsamen Ionen ein Hochspannungsbereich ohne Ionen entsteht.Alle negativen Ionen im Hochspannungsbereich beschleunigen ihre Bewegung.Wenn sie sich in die Cl-Ionenregion bewegen, verschwindet die Hochspannung und die Bewegungsgeschwindigkeit des Proteins verlangsamt sich.Nachdem der obige stabile Zustand erreicht ist, wird die Proteinprobe zwischen schnellen und langsamen Ionen konzentriert, um eine schmale Zwischenschicht zu bilden. Sie wird entsprechend der Menge der vom Protein getragenen negativen Ladung in Bänder angeordnet.Nachdem die konzentrierte Probe vom konzentrierten Gel in das Trenngel gelangt ist, steigt der pH-Wert des Gels, der Dissoziationsgrad von Gly steigt und die Mobilität steigt.Da sein Molekül außerdem klein ist, übertrifft es alle Proteinmoleküle.Unmittelbar nach der Wanderung der Cl-Ionen ist die niedrige Ionenkonzentration nicht mehr vorhanden und es entsteht eine konstante elektrische Feldstärke.Daher hängt die Trennung von Proteinproben im Trenngel hauptsächlich von seinen Ladungseigenschaften, seiner Molekülgröße und seiner Form ab.Die Porengröße des Trenngels hat eine bestimmte Größe.Bei Proteinen mit unterschiedlicher relativer Masse ist der Hystereseeffekt beim Passieren unterschiedlich.Selbst Partikel mit gleicher statischer Ladung trennen durch die Wirkung dieses Molekularsiebs Proteine unterschiedlicher Größe voneinander.
Differenz zwischen 10 % und 12 % Trennkleber
Je nach Molekulargewicht Ihres Zielproteins können Sie, wenn es sich um ein Protein mit einem höheren Molekulargewicht (über 60 kD) handelt, 10 % Kleber verwenden, wenn es sich um ein Protein mit einem Molekulargewicht zwischen 60 und 30 kD handelt, können Sie 12 % verwenden % Kleber, und wenn er weniger als 30 kD beträgt, verwende ich normalerweise 15 % Kleber.Der Hauptpunkt ist, dass sich Ihr Zielprotein möglicherweise genau in der Mitte des Gummis befindet, wenn die Indikatorlinie gerade aus der Gummiunterseite herausragt.
Die Porengröße des Gels ist bei unterschiedlichen Gelkonzentrationen ebenfalls unterschiedlich.Die Porengröße bei geringer Konzentration ist groß und die Porengröße bei großer Konzentration ist klein.Im Allgemeinen beträgt das Trenngel 12 % und das konzentrierte Gel 5 %, da der Zweck des konzentrierten Gels darin besteht, alle Proteine auf derselben Startlinie zu konzentrieren und dann zur Trennung in das Trenngel einzutreten.Abhängig von der Größe des Proteins.
Zeitpunkt der Veröffentlichung: 05.09.2022
