濃縮ゲルと分離ゲルの違い

濃縮ゲルと分離ゲルの違い

濃縮ゲルの pH 値は分離ゲルの pH 値とは異なります。前者は主に濃縮効果を示し、後者は電荷効果と分子ふるい効果を示します。集中効果は主に濃縮ジェルで完成します。濃縮ゲルのｐＨは６．８である。この pH 条件下では、緩衝液中の HCl のほぼすべての Cl イオンが解離し、Gly の等電点は 6.0 になります。電界中で非常にゆっくりと移動するマイナスイオンに解離されるイオンはほんのわずかです。この pH では酸性タンパク質がマイナスイオンに解離し、3 種類のイオンの移動速度は cl > 一般タンパク質 > Gly となります。電気泳動が開始されると、Cl イオンは高速で移動し、イオン濃度の低い領域が残ります。Gly は電場中で非常にゆっくりと移動するため、移動するイオンが不足し、高速イオンと低速イオンの間にイオンが欠如した高電圧領域が形成されます。高電圧領域のすべてのマイナスイオンはその動きを加速します。Clイオン領域に移動すると高電圧がなくなり、タンパク質の移動速度が遅くなります。上記の安定状態が確立された後、タンパク質サンプルは高速イオンと低速イオンの間に集中して狭い中間層を形成し、タンパク質が持つ負電荷の量に応じてバンド状に配置されます。濃縮サンプルが濃縮ゲルから分離ゲルに入ると、ゲルのpHが上昇し、Glyの解離度が増加し、移動度が上昇します。また、分子が小さいため、タンパク質の分子をすべて上回ります。Cl イオンが移動した直後は、低濃度のイオン濃度はなくなり、一定の電界強度が形成されます。したがって、分離ゲル内でのタンパク質サンプルの分離は、主にその荷電特性、分子サイズ、形状に依存します。分離ゲルの細孔径はある程度の大きさを持っています。相対質量が異なるタンパク質では、通過時に受けるヒステリシス効果が異なります。同じ静電荷を持った粒子であっても、このモレキュラーシーブの効果により、異なるサイズのタンパク質が互いに分離されます。