Ero tiivistetyn geelin ja erotusgeelin välillä
Konsentroidun geelin pH-arvo on erilainen kuin erotusgeelin pH-arvo.Edellinen osoittaa pääasiassa keskittymisvaikutusta, kun taas jälkimmäinen osoittaa varausvaikutuksen ja molekyyliseulavaikutuksen.Konsentraatiovaikutus on pääosin täydellinen tiivistetyssä geelissä.Konsentroidun geelin pH on 6,8.Näissä pH-olosuhteissa melkein kaikki puskurissa olevat HCl:n Cl-ionit dissosioituvat ja Gly:n isoelektrinen piste on 6,0.Vain harvat hajoavat negatiivisiksi ioneiksi, jotka liikkuvat hyvin hitaasti sähkökentässä.Happamat proteiinit dissosioituvat negatiivisiksi ioneiksi tässä pH:ssa, ja kolmen ionityypin migraationopeus on cl > Yleiset proteiinit > Gly.Elektroforeesin alkamisen jälkeen Cl-ionit liikkuvat nopeasti jättäen taakseen pienen ionipitoisuuden alueen.Gly liikkuu hyvin hitaasti sähkökentässä, mikä johtaa liikkuvien ionien puuttumiseen, joten nopeiden ja hitaiden ionien väliin muodostuu korkeajännitealue, josta puuttuu ioneja.Kaikki negatiiviset ionit korkeajännitealueella kiihdyttävät niiden liikettä.Kun ne siirtyvät Cl-ionialueelle, korkea jännite katoaa ja proteiinin liikkumisnopeus hidastuu.Kun yllä oleva stabiili tila on vakiintunut, proteiininäyte konsentroidaan nopeiden ja hitaiden ionien väliin kapeaksi välikerroksen muodostamiseksi. Se järjestetään vyöhykkeisiin proteiinin kuljettaman negatiivisen varauksen määrän mukaan.Kun konsentroitu näyte tulee erotusgeeliin tiivistetystä geelistä, geelin pH nousee, Gly:n dissosiaatioaste kasvaa ja liikkuvuus kasvaa.Lisäksi, koska sen molekyyli on pieni, se ylittää kaikki proteiinimolekyylit.Välittömästi Cl-ionien siirtymisen jälkeen alhainen ionipitoisuus ei enää ole olemassa, mikä muodostaa vakion sähkökentän voimakkuuden.Siksi proteiininäytteiden erottaminen erotusgeelissä riippuu pääasiassa sen varausominaisuuksista, molekyylikoosta ja muodosta.Erotusgeelin huokoskoolla on tietty koko.Proteiineille, joiden suhteellinen massa on erilainen, ohituksen yhteydessä saatu hystereesivaikutus on erilainen.Jopa hiukkaset, joilla on sama staattinen varaus, erottavat erikokoisia proteiineja toisistaan tämän molekyyliseulan vaikutuksesta.
Ero 10 % ja 12 % erotusliiman välillä
Jos kyseessä on proteiini, jonka molekyylipaino on suurempi (yli 60 kD), voit käyttää kohdeproteiinin molekyylipainon mukaan 10 % liimaa, jos kyseessä on 60-30 kd molekyylipainoinen proteiini, voit käyttää 12. % liimaa, ja jos se on alle 30kd, käytän yleensä 15 % liimaa.Pääasia on, että kun indikaattoriviiva vain loppuu kumipohjasta, kohdeproteiinisi voi olla juuri kumin keskellä.
Myös geelin eri pitoisuuksia vastaava geelin huokoskoko on erilainen.Huokoskoko pienellä pitoisuudella on suuri, ja huokoskoko suurella pitoisuudella on pieni.Yleensä erotusgeeli on 12 % ja tiivistetty geeli 5 %, koska tiivistetyn geelin tarkoituksena on väkevöidä kaikki proteiinit samalle lähtöviivalle ja sitten mennä erotusgeeliin erotusta varten.Proteiinin koosta riippuen.
Postitusaika: 05.09.2022
