Rozdiel medzi koncentrovaným gélom a separačným gélom
Hodnota pH koncentrovaného gélu je odlišná od hodnoty pH separačného gélu.Prvý vykazuje hlavne koncentračný účinok, zatiaľ čo druhý vykazuje nábojový účinok a účinok molekulového sita.Koncentračný účinok sa dotvára hlavne v koncentrovanom géli.pH koncentrovaného gélu je 6,8.Za týchto podmienok pH sú takmer všetky Cl ióny HCl v pufri disociované a izoelektrický bod Gly je 6,0.Len niektoré sú disociované na záporné ióny, ktoré sa v elektrickom poli pohybujú veľmi pomaly.Kyslé proteíny sa pri tomto pH disociujú na záporné ióny a rýchlosť migrácie týchto troch typov iónov je cl > Všeobecné proteíny > Gly.Po spustení elektroforézy sa ióny Cl rýchlo pohybujú a zanechávajú za sebou oblasť s nízkou koncentráciou iónov.Gly sa v elektrickom poli pohybuje veľmi pomaly, čo má za následok nedostatok pohyblivých iónov, takže medzi rýchlymi a pomalými iónmi sa vytvorí oblasť vysokého napätia bez iónov.Všetky záporné ióny v oblasti vysokého napätia urýchlia svoj pohyb.Keď sa presunú do oblasti Cl iónov, vysoké napätie zmizne a rýchlosť pohybu proteínu sa spomalí.Po ustálení vyššie uvedeného stabilného stavu sa vzorka proteínu koncentruje medzi rýchlymi a pomalými iónmi, aby sa vytvorila úzka medzivrstva, ktorá je usporiadaná do pásov podľa množstva negatívneho náboja prenášaného proteínom.Po vstupe koncentrovanej vzorky do separačného gélu z koncentrovaného gélu stúpa pH gélu, zvyšuje sa stupeň disociácie Gly a zvyšuje sa pohyblivosť.Navyše, pretože jeho molekula je malá, prevyšuje všetky molekuly bielkovín.Ihneď po migrácii iónov Cl už neexistuje nízka koncentrácia iónov, čo vytvára konštantnú silu elektrického poľa.Separácia proteínových vzoriek v separačnom géli preto závisí hlavne od jeho nábojových vlastností, veľkosti a tvaru molekuly.Veľkosť pórov separačného gélu má určitú veľkosť.Pre proteíny s rôznou relatívnou hmotnosťou je hysterézny efekt získaný pri prechode odlišný.Dokonca aj častice s rovnakým statickým nábojom oddelia proteíny rôznych veľkostí od seba vďaka účinku tohto molekulového sita.
Rozdiel medzi 10% a 12% separačného lepidla
Podľa molekulovej hmotnosti vášho cieľového proteínu, ak ide o proteín s väčšou molekulovou hmotnosťou (nad 60 kD), môžete použiť 10% lepidlo, ak ide o proteín s molekulovou hmotnosťou medzi 60 a 30 kD, môžete použiť 12 % lepidla, a ak je nižšie ako 30 kd, zvyčajne používam 15 % lepidla.Hlavným bodom je, že keď indikačná čiara práve vybieha z gumového dna, váš cieľový proteín môže byť práve v strede gumy.
Veľkosť pórov gélu zodpovedajúca rôznym koncentráciám gélu je tiež odlišná.Veľkosť pórov s malou koncentráciou je veľká a veľkosť pórov s veľkou koncentráciou je malá.Vo všeobecnosti je separačný gél 12 % a koncentrovaný gél je 5 %, pretože účelom koncentrovaného gélu je koncentrovať všetky proteíny na rovnakej štartovacej čiare a potom vstúpiť do separačného gélu na separáciu.V závislosti od veľkosti proteínu.
Čas odoslania: 05.09.2022
