Pagkakaiba sa pagitan ng concentrated gel at separation gel
Ang pH value ng concentrated gel ay iba sa separation gel.Ang una ay pangunahing nagpapakita ng epekto ng konsentrasyon, habang ang huli ay nagpapakita ng epekto ng pagsingil at epekto ng molekular na salaan.Ang epekto ng konsentrasyon ay pangunahing nakumpleto sa puro gel.Ang pH ng puro gel ay 6.8.Sa ilalim ng kondisyong ito ng pH, halos lahat ng Cl ions ng HCl sa buffer ay dissociated, at ang isoelectric point ng Gly ay 6.0.Iilan lamang ang nahahati sa mga negatibong ion, na napakabagal na gumagalaw sa larangan ng kuryente.Ang mga acidic na protina ay nahahati sa mga negatibong ion sa pH na ito, at ang rate ng paglipat ng tatlong uri ng mga ion ay cl > Pangkalahatang protina > Gly.Matapos magsimula ang electrophoresis, mabilis na gumagalaw ang mga Cl ions, na nag-iiwan ng mababang lugar ng konsentrasyon ng ion.Si Gly ay gumagalaw nang napakabagal sa electric field, na nagreresulta sa kakulangan ng mga gumagalaw na ions, kaya isang mataas na boltahe na rehiyon na kulang ng mga ion ay nabuo sa pagitan ng mabilis at mabagal na mga ion.Ang lahat ng mga negatibong ion sa rehiyon na may mataas na boltahe ay magpapabilis sa kanilang paggalaw.Kapag lumipat sila sa rehiyon ng Cl ion, nawawala ang mataas na boltahe, at bumabagal ang bilis ng paggalaw ng protina.Matapos maitatag ang matatag na estado sa itaas, ang sample ng protina ay puro sa pagitan ng mabilis at mabagal na mga ion upang bumuo ng isang makitid na interlayer, Ito ay nakaayos sa mga banda ayon sa dami ng negatibong singil na dala ng protina.Matapos makapasok ang concentrated sample sa separation gel mula sa concentrated gel, tumataas ang pH ng gel, tumataas ang dissociation degree ng Gly, at tumataas ang mobility.Bukod dito, dahil maliit ang molekula nito, lumalampas ito sa lahat ng molekula ng protina.Kaagad pagkatapos ng paglipat ng mga Cl ions, ang mababang konsentrasyon ng ion ay hindi na umiiral, na bumubuo ng isang pare-parehong lakas ng electric field.Samakatuwid, Ang paghihiwalay ng mga sample ng protina sa separation gel ay higit sa lahat ay nakasalalay sa mga katangian ng singil nito, laki at hugis ng molekular.Ang laki ng butas ng separation gel ay may isang tiyak na laki.Para sa mga protina na may iba't ibang kamag-anak na masa, ang epekto ng hysteresis na natatanggap kapag pumasa ay iba.Kahit na ang mga particle na may pantay na static na singil ay maghihiwalay ng mga protina na may iba't ibang laki mula sa isa't isa dahil sa epekto ng molekular na salaan na ito.
Pagkakaiba sa pagitan ng 10% at 12% ng separating glue
Ayon sa molecular weight ng iyong target na protina, kung ito ay isang protina na may mas malaking molekular na timbang (sa itaas 60KD), maaari kang gumamit ng 10% na pandikit, kung ito ay isang protina na may molekular na timbang sa pagitan ng 60 at 30kd, maaari kang gumamit ng 12 % glue, at kung mas mababa sa 30kd, kadalasang 15% glue ang ginagamit ko.Ang pangunahing punto ay kapag ang linya ng tagapagpahiwatig ay naubos lamang sa ilalim ng goma, ang iyong target na protina ay maaaring nasa gitna lamang ng goma.
Ang laki ng butas ng gel na naaayon sa iba't ibang konsentrasyon ng gel ay iba rin.Ang laki ng butas na may maliit na konsentrasyon ay malaki, at ang laki ng butas na may malaking konsentrasyon ay maliit.Sa pangkalahatan, ang separation gel ay 12% at ang concentrated gel ay 5%, dahil ang layunin ng concentrated gel ay pag-concentrate ang lahat ng protina sa parehong panimulang linya, at pagkatapos ay ipasok ang separation gel para sa paghihiwalay.Depende sa laki ng protina.
Oras ng post: Set-05-2022
