Atšķirība starp koncentrētu želeju un atdalīšanas želeju
Koncentrētā gēla pH vērtība atšķiras no atdalīšanas gēla pH vērtības.Pirmais galvenokārt parāda koncentrācijas efektu, bet otrais parāda lādiņa efektu un molekulārā sieta efektu.Koncentrācijas efekts galvenokārt tiek pabeigts koncentrētajā gēlā.Koncentrētā gēla pH ir 6,8.Šajos pH apstākļos gandrīz visi HCl Cl joni buferšķīdumā ir atdalīti, un Gly izoelektriskais punkts ir 6,0.Tikai daži ir sadalīti negatīvos jonos, kas elektriskajā laukā pārvietojas ļoti lēni.Skābie proteīni pie šī pH tiek sadalīti negatīvos jonos, un triju veidu jonu migrācijas ātrums ir cl > Vispārējie proteīni > Gly.Pēc elektroforēzes sākuma Cl joni ātri pārvietojas, atstājot aiz sevis zemas jonu koncentrācijas apgabalu.Gly elektriskajā laukā pārvietojas ļoti lēni, kā rezultātā trūkst kustīgu jonu, tāpēc starp ātrajiem un lēnajiem joniem veidojas augstsprieguma reģions, kurā trūkst jonu.Visi negatīvie joni augstsprieguma reģionā paātrinās to kustību.Pārejot uz Cl jonu reģionu, pazūd augstais spriegums, un proteīna kustības ātrums palēninās.Pēc iepriekšminētā stabilā stāvokļa noteikšanas proteīna paraugs tiek koncentrēts starp ātrajiem un lēnajiem joniem, veidojot šauru starpslāni. Tas tiek sakārtots joslās atbilstoši proteīna negatīvā lādiņa daudzumam.Pēc tam, kad koncentrētais paraugs nonāk atdalīšanas gēlā no koncentrētā gēla, gēla pH paaugstinās, palielinās Gly disociācijas pakāpe un palielinās mobilitāte.Turklāt, tā kā tā molekula ir maza, tā pārsniedz visas olbaltumvielu molekulas.Tūlīt pēc Cl jonu migrācijas zemā jonu koncentrācija vairs nepastāv, veidojot nemainīgu elektriskā lauka stiprumu.Tāpēc olbaltumvielu paraugu atdalīšana atdalīšanas gēlā galvenokārt ir atkarīga no tā lādiņa īpašībām, molekulārā izmēra un formas.Atdalīšanas gēla poru izmēram ir noteikts izmērs.Olbaltumvielām ar atšķirīgu relatīvo masu histerēzes efekts, kas tiek saņemts caurlaides laikā, ir atšķirīgs.Pat daļiņas ar vienādu statisko lādiņu šī molekulārā sieta iedarbības dēļ atdalīs viena no otras dažāda izmēra olbaltumvielas.
Starpība starp 10% un 12% atdalošās līmes
Atbilstoši jūsu mērķa proteīna molekulmasai, ja tas ir proteīns ar lielāku molekulmasu (virs 60 KD), varat izmantot 10% līmi, ja tas ir proteīns ar molekulmasu no 60 līdz 30 kd, varat izmantot 12 kd. % līme, un ja tā ir zemāka par 30kd, tad parasti izmantoju 15% līmi.Galvenais ir tas, ka tad, kad indikatora līnija tikko beidzas no gumijas dibena, jūsu mērķa proteīns var būt tieši gumijas vidū.
Gēla poru izmērs, kas atbilst dažādām gēla koncentrācijām, arī ir atšķirīgs.Poru izmērs ar mazu koncentrāciju ir liels, un poru izmērs ar lielu koncentrāciju ir mazs.Parasti atdalīšanas gēls ir 12%, bet koncentrētais gēls ir 5%, jo koncentrētā gēla mērķis ir koncentrēt visus proteīnus uz vienas sākuma līnijas un pēc tam ievadīt atdalīšanas gēlā atdalīšanai.Atkarībā no proteīna lieluma.
Publicēšanas laiks: 05.05.2022
