Diferența dintre gel concentrat și gel de separare
Valoarea pH-ului gelului concentrat este diferită de cea a gelului de separare.Primul arată în principal efect de concentrare, în timp ce al doilea prezintă efect de încărcare și efect de sită moleculară.Efectul de concentrare este completat în principal în gelul concentrat.pH-ul gelului concentrat este 6,8.În această condiție de pH, aproape toți ionii de Cl ai HCl din tampon sunt disociați, iar punctul izoelectric al Gly este 6,0.Doar câțiva sunt disociați în ioni negativi, care se mișcă foarte lent în câmpul electric.Proteinele acide sunt disociate în ioni negativi la acest pH, iar rata de migrare a celor trei tipuri de ioni este cl > Proteine generale > Gly.După începerea electroforezei, ionii de Cl se mișcă rapid, lăsând în urmă o zonă cu concentrație scăzută de ioni.Gly se mișcă foarte lent în câmpul electric, rezultând lipsa ionilor în mișcare, astfel încât o regiune de înaltă tensiune lipsită de ioni se formează între ionii rapizi și lenți.Toți ionii negativi din regiunea de înaltă tensiune își vor accelera mișcarea.Când se deplasează în regiunea ionică Cl, tensiunea înaltă dispare, iar viteza de mișcare a proteinei încetinește.După ce starea stabilă de mai sus este stabilită, proba de proteină este concentrată între ioni rapizi și lenți pentru a forma un strat intermediar îngust, este aranjată în benzi în funcție de cantitatea de sarcină negativă purtată de proteină.După ce proba concentrată intră în gelul de separare de gelul concentrat, pH-ul gelului crește, gradul de disociere al Gly crește, iar mobilitatea crește.Mai mult, deoarece molecula sa este mică, depășește toate moleculele de proteine.Imediat după migrarea ionilor de Cl, concentrația scăzută de ioni nu mai există, formând o intensitate constantă a câmpului electric.Prin urmare, separarea probelor de proteine în gelul de separare depinde în principal de proprietățile sale de încărcare, dimensiunea moleculară și forma.Dimensiunea porilor gelului de separare are o anumită dimensiune.Pentru proteinele cu masă relativă diferită, efectul de histerezis primit la trecere este diferit.Chiar și particulele cu sarcini statice egale vor separa proteinele de dimensiuni diferite unele de altele datorită efectului acestei site moleculare.
Diferență între 10% și 12% adeziv de separare
În funcție de greutatea moleculară a proteinei țintă, dacă este o proteină cu o greutate moleculară mai mare (peste 60KD), puteți folosi 10% adeziv, dacă este o proteină cu o greutate moleculară între 60 și 30kd, puteți folosi 12 % clei, iar dacă este mai mic de 30kd, folosesc de obicei 15% clei.Ideea principală este că atunci când linia indicatorului iese din fundul cauciucului, proteina țintă poate fi chiar în mijlocul cauciucului.
Dimensiunea porilor gelului corespunzătoare diferitelor concentrații de gel este, de asemenea, diferită.Dimensiunea porilor cu concentrație mică este mare, iar dimensiunea porilor cu concentrație mare este mică.În general, gelul de separare este de 12%, iar gelul concentrat este de 5%, deoarece scopul gelului concentrat este de a concentra toate proteinele pe aceeași linie de pornire și apoi introduceți gelul de separare pentru separare.În funcție de mărimea proteinei.
Ora postării: 05-09-2022
