Концентрацияланган гел менен бөлүүчү гелдин ортосундагы айырма
Концентрацияланган гелдин рН мааниси бөлүүчү гелден айырмаланат.Биринчиси негизинен концентрация эффектин көрсөтсө, экинчиси заряд эффектисин жана молекулярдык электен өткөрүүчү эффектти көрсөтөт.Концентрация эффектиси негизинен концентрацияланган гелде аяктайт.Концентрацияланган гелдин рН 6,8.Мындай рН шартында буфердеги HClдин дээрлик бардык Cl иондору диссоциацияланат жана Глинин изоэлектрдик чекити 6,0.Кээ бирлери гана терс иондорго диссоциацияланат, алар электр талаасында өтө жай кыймылдашат.Бул рНда кычкыл белоктор терс иондорго диссоциацияланат жана иондордун үч түрүнүн миграция ылдамдыгы cl > Жалпы белоктор > Gly.Электрофорез башталгандан кийин, Cl иондору ылдам кыймылдап, артта ион концентрациясы төмөн аймакты калтырат.Гли электр талаасында өтө жай кыймылдайт, натыйжада кыймылдуу иондор жок, ошондуктан тез жана жай иондор арасында иондор жок жогорку вольттуу аймак пайда болот.Жогорку вольттуу аймактагы бардык терс иондор алардын кыймылын тездетет.Алар Cl ион аймагына өткөндө жогорку чыңалуу жоголот жана белоктун кыймыл ылдамдыгы жайлайт.Жогорудагы туруктуу абал орнотулгандан кийин, белок үлгүсү тез жана жай иондор арасында топтолуп, тар аралык катмарды пайда кылат, ал белок алып жүргөн терс заряддын көлөмүнө жараша тилкелерге жайгаштырылат.Концентрацияланган үлгү концентрацияланган гелден бөлүүчү гелге киргенден кийин гелдин рН жогорулайт, Глайдын диссоциациялануу даражасы жогорулайт жана мобилдүүлүк жогорулайт.Болгондо да, анын молекуласы кичинекей болгондуктан, бардык белок молекулаларынан ашып кетет.Cl иондору көчкөндөн кийин дароо эле иондун төмөн концентрациясы жок болуп, туруктуу электр талаасынын чыңалуусун пайда кылат.Ошондуктан, бөлүп гелинде белок үлгүлөрүн бөлүү негизинен анын заряд касиеттерине, молекулалык өлчөмүнө жана формасына жараша болот.Бөлүү гелинин тешикчелери белгилүү бир өлчөмдө бар.Салыштырмалуу массасы ар кандай белоктор үчүн өтүү учурунда алынган гистерезис эффектиси башка.Бирдей статикалык зарядга ээ болгон бөлүкчөлөр да бул молекулярдык электин таасиринен улам ар кандай чоңдуктагы белокторду бири-биринен ажыратышат.
Ажыратуучу клейдин 10% жана 12% ортосундагы айырма
Максаттуу протеиндин молекулярдык салмагына ылайык, эгер ал чоңураак молекулярдык салмагы бар белок болсо (60КДден жогору), анда 10% желим, ал эми молекулалык салмагы 60 жана 30кд болгон белок болсо, анда 12 колдоно аласыз. % клей, ал эми 30кддан төмөн болсо, мен көбүнчө 15% клей колдоном.Негизгиси, индикатор сызыгы резина түбүнөн түгөнүп калганда, сиздин максаттуу белок резинанын ортосунда болушу мүмкүн.
Гельдин ар кандай концентрацияларына туура келген тешикчелердин өлчөмү да ар түрдүү.Кичинекей концентрациялуу тешикчелердин көлөмү чоң, ал эми чоң концентрациясы бар тешикчелердин көлөмү кичине.Жалпысынан бөлүү гели 12% жана концентрацияланган гел 5% түзөт, анткени концентрацияланган гелдин максаты бардык протеиндерди бир эле баштапкы сызыкка топтоо, андан кийин бөлүү үчүн бөлүүчү гелге кирүү.белоктун өлчөмүнө жараша.
Посттун убактысы: 05-05-2022
