Διαφορά μεταξύ συμπυκνωμένης γέλης και γέλης διαχωρισμού
Η τιμή pH της συμπυκνωμένης γέλης είναι διαφορετική από αυτή της γέλης διαχωρισμού.Το πρώτο εμφανίζει κυρίως αποτέλεσμα συγκέντρωσης, ενώ το δεύτερο δείχνει επίδραση φορτίου και μοριακό κόσκινο.Το αποτέλεσμα της συγκέντρωσης ολοκληρώνεται κυρίως στο συμπυκνωμένο πήκτωμα.Το pH της συμπυκνωμένης γέλης είναι 6,8.Κάτω από αυτήν την συνθήκη pH, σχεδόν όλα τα ιόντα Cl του HCl στο ρυθμιστικό διαλύονται και το ισοηλεκτρικό σημείο του Gly είναι 6,0.Μόνο μερικά διασπώνται σε αρνητικά ιόντα, τα οποία κινούνται πολύ αργά στο ηλεκτρικό πεδίο.Οι όξινες πρωτεΐνες διασπώνται σε αρνητικά ιόντα σε αυτό το pH και ο ρυθμός μετανάστευσης των τριών τύπων ιόντων είναι cl > Γενικές πρωτεΐνες > Gly.Μετά την έναρξη της ηλεκτροφόρησης, τα ιόντα Cl κινούνται γρήγορα, αφήνοντας πίσω μια περιοχή χαμηλής συγκέντρωσης ιόντων.Το Gly κινείται πολύ αργά στο ηλεκτρικό πεδίο, με αποτέλεσμα την έλλειψη κινούμενων ιόντων, έτσι σχηματίζεται μια περιοχή υψηλής τάσης χωρίς ιόντα μεταξύ γρήγορων και αργών ιόντων.Όλα τα αρνητικά ιόντα στην περιοχή υψηλής τάσης θα επιταχύνουν την κίνησή τους.Όταν μετακινούνται στην περιοχή ιόντων Cl, η υψηλή τάση εξαφανίζεται και η ταχύτητα κίνησης της πρωτεΐνης επιβραδύνεται.Αφού εδραιωθεί η παραπάνω σταθερή κατάσταση, το δείγμα πρωτεΐνης συγκεντρώνεται μεταξύ ταχέων και αργών ιόντων για να σχηματιστεί ένα στενό ενδιάμεσο στρώμα, το οποίο διατάσσεται σε ζώνες ανάλογα με την ποσότητα του αρνητικού φορτίου που μεταφέρει η πρωτεΐνη.Αφού το συμπυκνωμένο δείγμα εισέλθει στη γέλη διαχωρισμού από τη συμπυκνωμένη γέλη, το pH της γέλης αυξάνεται, ο βαθμός διάστασης του Gly αυξάνεται και η κινητικότητα αυξάνεται.Επιπλέον, επειδή το μόριό του είναι μικρό, ξεπερνά όλα τα μόρια πρωτεΐνης.Αμέσως μετά τη μετανάστευση των ιόντων Cl, η χαμηλή συγκέντρωση ιόντων δεν υπάρχει πλέον, σχηματίζοντας μια σταθερή ένταση ηλεκτρικού πεδίου.Επομένως, ο διαχωρισμός των δειγμάτων πρωτεΐνης στο πήκτωμα διαχωρισμού εξαρτάται κυρίως από τις ιδιότητες φορτίου, το μοριακό μέγεθος και το σχήμα του.Το μέγεθος των πόρων της γέλης διαχωρισμού έχει ένα ορισμένο μέγεθος.Για πρωτεΐνες με διαφορετική σχετική μάζα, το φαινόμενο υστέρησης που λαμβάνεται κατά τη διέλευση είναι διαφορετικό.Ακόμη και σωματίδια με ίσα στατικά φορτία θα διαχωρίσουν πρωτεΐνες διαφορετικών μεγεθών μεταξύ τους λόγω της επίδρασης αυτού του μοριακού κόσκινου.
Διαφορά μεταξύ 10% και 12% της κόλλας διαχωρισμού
Σύμφωνα με το μοριακό βάρος της πρωτεΐνης-στόχου σας, εάν πρόκειται για πρωτεΐνη με μεγαλύτερο μοριακό βάρος (πάνω από 60 KD), μπορείτε να χρησιμοποιήσετε 10% κόλλα, εάν είναι πρωτεΐνη με μοριακό βάρος μεταξύ 60 και 30 kd, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε 12 % κόλλα, και αν είναι κάτω από 30kd, συνήθως χρησιμοποιώ κόλλα 15%.Το κύριο σημείο είναι ότι όταν η γραμμή ένδειξης μόλις τελειώσει από το ελαστικό κάτω μέρος, η πρωτεΐνη-στόχος σας μπορεί να βρίσκεται ακριβώς στη μέση του καουτσούκ.
Το μέγεθος πόρων της γέλης που αντιστοιχεί σε διαφορετικές συγκεντρώσεις γέλης είναι επίσης διαφορετικό.Το μέγεθος πόρων με μικρή συγκέντρωση είναι μεγάλο και το μέγεθος πόρων με μεγάλη συγκέντρωση είναι μικρό.Γενικά, η γέλη διαχωρισμού είναι 12% και η συμπυκνωμένη γέλη είναι 5%, επειδή ο σκοπός της συμπυκνωμένης γέλης είναι να συμπυκνώσει όλες τις πρωτεΐνες στην ίδια γραμμή εκκίνησης και στη συνέχεια να εισέλθει στη γέλη διαχωρισμού για διαχωρισμό.Ανάλογα με το μέγεθος της πρωτεΐνης.
Ώρα δημοσίευσης: Σεπ-05-2022
