濃縮膠和分離膠的區別

濃縮膠和分離膠的區別

濃縮膠的pH值與分離膠的不同。前者主要表現為濃縮效應，後者表現為電荷效應和分子篩效應。濃縮作用主要在濃縮膠中完成。濃縮凝膠的 pH 值為 6.8。在此pH條件下，緩衝液中HCl的Cl離子幾乎全部解離，Gly的等電點為6.0。只有少數解離成負離子，負離子在電場中移動非常緩慢。酸性蛋白質在此pH值下解離成負離子，三類離子的遷移速率為cl>一般蛋白質>Gly。電泳開始後，Cl離子快速移動，留下低離子濃度區域。Gly在電場中移動非常緩慢，導致缺少移動離子，因此在快離子和慢離子之間形成缺少離子的高壓區。所有處於高壓區的負離子都會加速它們的運動。當它們移動到Cl離子區時，高壓消失，蛋白質的移動速度減慢。上述穩定狀態建立後，蛋白質樣品集中在快離子和慢離子之間，形成狹窄的夾層，根據蛋白質所帶負電荷的多少排列成條帶。濃縮後的樣品從濃縮膠進入分離膠後，凝膠的pH升高，Gly的解離度增加，遷移率升高。而且，由於它的分子很小，超過了所有的蛋白質分子。Cl離子遷移後，低離子濃度立即不復存在，形成恆定的電場強度。因此，分離膠對蛋白質樣品的分離主要取決於其電荷性質、分子大小和形狀。分離膠的孔徑有一定的大小。對於不同相對質量的蛋白質，通過時受到的滯後效應是不同的。由於這種分子篩的作用，即使具有相同靜電荷的粒子也會將不同大小的蛋白質彼此分開。