Razlika med koncentriranim gelom in ločevalnim gelom
Vrednost pH koncentriranega gela je drugačna od vrednosti ločevalnega gela.Prvi kaže predvsem učinek koncentracije, medtem ko drugi kaže učinek naboja in učinek molekularnega sita.Koncentracijski učinek je v glavnem zaključen v koncentriranem gelu.pH koncentriranega gela je 6,8.Pod tem pH pogojem so skoraj vsi Cl ioni HCl v pufru disociirani, izoelektrična točka Gly pa je 6,0.Le nekaj jih je disociiranih na negativne ione, ki se v električnem polju premikajo zelo počasi.Kisli proteini se pri tem pH disociirajo na negativne ione, hitrost migracije treh vrst ionov pa je cl > Splošni proteini > Gly.Po začetku elektroforeze se ioni Cl premikajo hitro in za seboj puščajo območje z nizko koncentracijo ionov.Gly se v električnem polju premika zelo počasi, kar povzroči pomanjkanje gibljivih ionov, zato se med hitrimi in počasnimi ioni oblikuje visokonapetostno območje brez ionov.Vsi negativni ioni v visokonapetostnem območju bodo pospešili svoje gibanje.Ko se premaknejo v območje ionov Cl, visoka napetost izgine in hitrost gibanja proteina se upočasni.Ko je zgornje stabilno stanje vzpostavljeno, se vzorec proteina koncentrira med hitrimi in počasnimi ioni, da se tvori ozek vmesni sloj, ki je razporejen v pasove glede na količino negativnega naboja, ki ga nosi protein.Ko koncentrirani vzorec vstopi v ločevalni gel od koncentriranega gela, se pH gela dvigne, stopnja disociacije Gly se poveča in mobilnost se poveča.Še več, ker je njegova molekula majhna, presega vse beljakovinske molekule.Takoj po selitvi ionov Cl nizka koncentracija ionov ne obstaja več, kar tvori konstantno jakost električnega polja.Zato je ločevanje vzorcev beljakovin v ločevalnem gelu v glavnem odvisno od njegovih lastnosti naboja, velikosti in oblike molekul.Velikost por ločilnega gela ima določeno velikost.Pri proteinih z različno relativno maso je učinek histereze, ki ga dobimo pri prehodu, drugačen.Tudi delci z enakimi statičnimi naboji bodo zaradi učinka tega molekularnega sita ločili proteine različnih velikosti drug od drugega.
Razlika med 10% in 12% ločilnega lepila
Glede na molekulsko maso vaše ciljne beljakovine, če gre za beljakovino z večjo molekulsko maso (nad 60KD), lahko uporabite 10% lepilo, če gre za beljakovino z molekulsko maso med 60 in 30kD, lahko uporabite 12% lepila. % lepila, če pa je nižja od 30kd, običajno uporabim 15 % lepila.Glavna poanta je, da ko se črta indikatorja ravnokar izteče iz gumijastega dna, je lahko vaš ciljni protein ravno na sredini gume.
Tudi velikost por gela, ki ustreza različnim koncentracijam gela, je različna.Velikost por z majhno koncentracijo je velika, velikost por z veliko koncentracijo pa majhna.Na splošno je ločevalni gel 12 %, koncentrirani gel pa 5 %, ker je namen koncentriranega gela koncentrirati vse beljakovine na isti začetni liniji in nato vstopiti v ločevalni gel za ločevanje.Odvisno od velikosti beljakovin.
Čas objave: 5. september 2022
