Différence entre gel concentré et gel de séparation
La valeur du pH du gel concentré est différente de celle du gel de séparation.Le premier montre principalement un effet de concentration, tandis que le second montre un effet de charge et un effet de tamis moléculaire.L'effet de concentration est principalement complété dans le gel concentré.Le pH du gel concentré est de 6,8.Dans cette condition de pH, presque tous les ions Cl de HCl dans le tampon sont dissociés et le point isoélectrique de Gly est de 6,0.Seuls quelques-uns sont dissociés en ions négatifs, qui se déplacent très lentement dans le champ électrique.Les protéines acides sont dissociées en ions négatifs à ce pH, et la vitesse de migration des trois types d'ions est cl > Protéines générales > Gly.Après le début de l'électrophorèse, les ions Cl se déplacent rapidement, laissant derrière eux une zone à faible concentration d'ions.Gly se déplace très lentement dans le champ électrique, ce qui entraîne un manque d'ions en mouvement, de sorte qu'une région à haute tension dépourvue d'ions se forme entre les ions rapides et lents.Tous les ions négatifs dans la région à haute tension accéléreront leur mouvement.Lorsqu'ils se déplacent vers la région de l'ion Cl, la haute tension disparaît et la vitesse de déplacement de la protéine ralentit.Une fois l'état stable ci-dessus établi, l'échantillon de protéine est concentré entre les ions rapides et lents pour former une couche intermédiaire étroite. Il est organisé en bandes en fonction de la quantité de charge négative portée par la protéine.Une fois que l'échantillon concentré est entré dans le gel de séparation à partir du gel concentré, le pH du gel augmente, le degré de dissociation de Gly augmente et la mobilité augmente.De plus, parce que sa molécule est petite, elle dépasse toutes les molécules protéiques.Immédiatement après la migration des ions Cl, la faible concentration en ions n'existe plus, formant une intensité de champ électrique constante.Par conséquent, la séparation des échantillons de protéines dans le gel de séparation dépend principalement de ses propriétés de charge, de sa taille moléculaire et de sa forme.La taille des pores du gel de séparation a une certaine taille.Pour des protéines de masse relative différente, l'effet d'hystérésis reçu au passage est différent.Même les particules avec des charges statiques égales sépareront les protéines de tailles différentes les unes des autres en raison de l'effet de ce tamis moléculaire.
Différence entre 10% et 12% de colle séparatrice
Selon le poids moléculaire de votre protéine cible, s'il s'agit d'une protéine de poids moléculaire plus important (supérieur à 60KD), vous pouvez utiliser 10% de colle, s'il s'agit d'une protéine de poids moléculaire compris entre 60 et 30kd, vous pouvez utiliser 12 % de colle, et s'il est inférieur à 30kd, j'utilise généralement 15% de colle.Le point principal est que lorsque la ligne indicatrice sort du fond du caoutchouc, votre protéine cible peut se trouver juste au milieu du caoutchouc.
La taille des pores du gel correspondant à différentes concentrations de gel est également différente.La taille des pores à faible concentration est grande et la taille des pores à grande concentration est petite.Généralement, le gel de séparation est de 12 % et le gel concentré de 5 %, car le but du gel concentré est de concentrer toutes les protéines sur la même ligne de départ, puis d'entrer dans le gel de séparation pour la séparation.Selon la taille de la protéine.
Heure de publication : 05 septembre 2022
