Konsantre jel ve ayırma jeli arasındaki fark
Konsantre jelin pH değeri ayırma jelinden farklıdır.İlki esas olarak konsantrasyon etkisini gösterirken, ikincisi şarj etkisi ve moleküler elek etkisi gösterir.Konsantrasyon etkisi esas olarak konsantre jelde tamamlanır.Konsantre jelin pH'ı 6.8'dir.Bu pH koşulu altında, tampondaki HCl'nin hemen hemen tüm Cl iyonları ayrışır ve Gly'nin izoelektrik noktası 6.0'dır.Sadece birkaçı elektrik alanında çok yavaş hareket eden negatif iyonlara ayrışır.Asidik proteinler bu pH değerinde negatif iyonlara ayrışır ve üç tip iyonun göç hızı cl > Genel proteinler > Gly şeklindedir.Elektroforez başladıktan sonra, Cl iyonları geride düşük iyon konsantrasyonlu bir alan bırakarak hızlı hareket eder.Gly elektrik alanında çok yavaş hareket eder, bu da hareketli iyonların eksikliğine neden olur, bu nedenle hızlı ve yavaş iyonlar arasında iyon içermeyen yüksek voltajlı bir bölge oluşur.Yüksek voltaj bölgesindeki tüm negatif iyonlar hareketlerini hızlandıracaktır.Cl iyon bölgesine geçtiklerinde yüksek voltaj kaybolur ve proteinin hareket hızı yavaşlar.Yukarıdaki kararlı durum oluşturulduktan sonra, protein numunesi hızlı ve yavaş iyonlar arasında konsantre edilerek dar bir ara katman oluşturulur. Protein tarafından taşınan negatif yük miktarına göre bantlar halinde düzenlenir.Konsantre numune konsantre jelden ayırma jeline girdikten sonra jelin pH'ı yükselir, Gly'nin ayrışma derecesi artar ve hareketlilik yükselir.Ayrıca molekülü küçük olduğu için tüm protein moleküllerini aşar.Cl iyonları göç ettikten hemen sonra, düşük iyon konsantrasyonu artık mevcut değildir ve sabit bir elektrik alan kuvveti oluşturur.Bu nedenle, ayırma jelinde protein örneklerinin ayrılması esas olarak jelin yük özelliklerine, moleküler boyutuna ve şekline bağlıdır.Ayırma jelinin gözenek boyutu belli bir büyüklüğe sahiptir.Farklı bağıl kütleye sahip proteinler için geçerken alınan histerezis etkisi farklıdır.Eşit statik yüke sahip parçacıklar bile bu moleküler eleğin etkisiyle farklı boyutlardaki proteinleri birbirinden ayıracaktır.
Ayırma tutkalının %10 ile %12'si arasındaki fark
Hedef proteininizin moleküler ağırlığına göre, moleküler ağırlığı daha büyük (60KD'nin üzerinde) olan bir protein ise %10, moleküler ağırlığı 60 ile 30kd arasında olan bir protein ise 12 tutkal kullanabilirsiniz. % yapıştırıcı ve eğer 30kd'den düşükse, genellikle % 15 yapıştırıcı kullanırım.Ana nokta, gösterge çizgisi kauçuğun tabanından yeni çıktığında, hedef proteininizin kauçuğun tam ortasında olabilmesidir.
Farklı jel konsantrasyonlarına karşılık gelen jelin gözenek boyutu da farklıdır.Küçük konsantrasyonlu gözenek boyutu büyüktür ve büyük konsantrasyonlu gözenek boyutu küçüktür.Genel olarak ayırma jeli %12'dir ve konsantre jel %5'tir, çünkü konsantre jelin amacı tüm proteinleri aynı başlangıç çizgisinde konsantre etmek ve ardından ayırma için ayırma jeline girmektir.Proteinin boyutuna bağlı olarak.
Gönderim zamanı: Eylül-05-2022
