Differenza tra gel concentrato e gel di separazione
Il valore del pH del gel concentrato è diverso da quello del gel di separazione.Il primo mostra principalmente l'effetto di concentrazione, mentre il secondo mostra l'effetto di carica e l'effetto del setaccio molecolare.L'effetto di concentrazione si completa principalmente nel gel concentrato.Il pH del gel concentrato è 6,8.In questa condizione di pH, quasi tutti gli ioni Cl di HCl nel tampone sono dissociati e il punto isoelettrico di Gly è 6,0.Solo pochi sono dissociati in ioni negativi, che si muovono molto lentamente nel campo elettrico.Le proteine acide sono dissociate in ioni negativi a questo pH e la velocità di migrazione dei tre tipi di ioni è cl > Proteine generali > Gly.Dopo l'inizio dell'elettroforesi, gli ioni Cl si muovono velocemente, lasciando dietro di sé un'area a bassa concentrazione di ioni.Gly si muove molto lentamente nel campo elettrico, con conseguente mancanza di ioni in movimento, quindi si forma una regione ad alta tensione priva di ioni tra ioni veloci e lenti.Tutti gli ioni negativi nella regione ad alta tensione accelereranno il loro movimento.Quando si spostano nella regione degli ioni Cl, l'alta tensione scompare e la velocità di movimento della proteina rallenta.Dopo aver stabilito lo stato stabile di cui sopra, il campione proteico viene concentrato tra ioni veloci e lenti per formare uno stretto strato intermedio, che viene organizzato in bande in base alla quantità di carica negativa trasportata dalla proteina.Dopo che il campione concentrato entra nel gel di separazione dal gel concentrato, il pH del gel aumenta, il grado di dissociazione di Gly aumenta e la mobilità aumenta.Inoltre, poiché la sua molecola è piccola, supera tutte le molecole proteiche.Immediatamente dopo la migrazione degli ioni Cl, la bassa concentrazione di ioni non esiste più, formando un'intensità di campo elettrico costante.Pertanto, la separazione dei campioni proteici nel gel di separazione dipende principalmente dalle sue proprietà di carica, dalla dimensione molecolare e dalla forma.La dimensione dei pori del gel di separazione ha una certa dimensione.Per le proteine con massa relativa diversa, l'effetto di isteresi ricevuto durante il passaggio è diverso.Anche le particelle con cariche statiche uguali separeranno le proteine di dimensioni diverse l'una dall'altra a causa dell'effetto di questo setaccio molecolare.
Differenza tra il 10% e il 12% di colla separatrice
In base al peso molecolare della tua proteina target, se è una proteina con un peso molecolare maggiore (superiore a 60KD), puoi usare il 10% di colla, se è una proteina con un peso molecolare compreso tra 60 e 30kD, puoi usare 12 % di colla, e se è inferiore a 30kd, di solito uso il 15% di colla.Il punto principale è che quando la linea dell'indicatore esce appena dal fondo di gomma, la tua proteina bersaglio può trovarsi proprio nel mezzo della gomma.
Anche la dimensione dei pori del gel corrispondente a diverse concentrazioni di gel è diversa.La dimensione dei pori con una piccola concentrazione è grande e la dimensione dei pori con una grande concentrazione è piccola.Generalmente, il gel di separazione è del 12% e il gel concentrato è del 5%, perché lo scopo del gel concentrato è quello di concentrare tutte le proteine sulla stessa linea di partenza, quindi entrare nel gel di separazione per la separazione.A seconda delle dimensioni della proteina.
Tempo di pubblicazione: settembre-05-2022
