केंद्रित जेल आणि पृथक्करण जेलमधील फरक

विभक्त, आणि Gly चा समविद्युत बिंदू 6.0 आहे.केवळ काही नकारात्मक आयनांमध्ये विलग होतात, जे विद्युत क्षेत्रामध्ये अतिशय मंद गतीने फिरतात.आम्लीय प्रथिने या pH वर नकारात्मक आयनांमध्ये विलग होतात आणि तीन प्रकारच्या आयनांचे स्थलांतर दर cl > सामान्य प्रथिने > Gly आहे.इलेक्ट्रोफोरेसीस सुरू झाल्यानंतर, Cl आयन वेगाने हलतात, कमी आयन एकाग्रता क्षेत्र मागे सोडतात.विद्युत क्षेत्रामध्ये ग्लाय अतिशय मंद गतीने फिरतो, परिणामी हलणारे आयन नसतात, त्यामुळे वेगवान आणि मंद आयनांमध्ये आयन नसलेला उच्च-व्होल्टेज प्रदेश तयार होतो.उच्च-व्होल्टेज प्रदेशातील सर्व नकारात्मक आयन त्यांच्या हालचालींना गती देतील.जेव्हा ते Cl आयन प्रदेशात जातात तेव्हा उच्च व्होल्टेज नाहीसे होते आणि प्रथिनांच्या हालचालीचा वेग कमी होतो.वरील स्थिर स्थिती प्रस्थापित झाल्यानंतर, प्रथिने नमुना जलद आणि संथ आयनांमध्ये केंद्रित केला जातो ज्यामुळे एक अरुंद आंतरथर तयार होतो, प्रथिनेद्वारे वाहून नेलेल्या नकारात्मक चार्जच्या प्रमाणानुसार ते बँडमध्ये व्यवस्थित केले जाते.केंद्रित नमुना एकाग्र जेलपासून विभक्तीकरण जेलमध्ये प्रवेश केल्यानंतर, जेलचा पीएच वाढतो, ग्लायचे पृथक्करण पदवी वाढते आणि गतिशीलता वाढते.शिवाय, त्याचे रेणू लहान असल्यामुळे ते सर्व प्रथिन रेणूंपेक्षा जास्त आहे.Cl आयन स्थलांतरित झाल्यानंतर लगेच, कमी आयन एकाग्रता यापुढे अस्तित्वात नाही, ज्यामुळे स्थिर विद्युत क्षेत्राची ताकद निर्माण होते.म्हणून, पृथक्करण जेलमधील प्रथिनांचे नमुने वेगळे करणे मुख्यत्वे त्याच्या चार्ज गुणधर्मांवर, आण्विक आकारावर आणि आकारावर अवलंबून असते.सेपरेशन जेलच्या छिद्राचा आकार विशिष्ट आकाराचा असतो.भिन्न सापेक्ष वस्तुमान असलेल्या प्रथिनांसाठी, उत्तीर्ण होताना प्राप्त होणारा हिस्टेरेसिस प्रभाव भिन्न असतो.या आण्विक चाळणीच्या प्रभावामुळे समान स्थिर शुल्क असलेले कण देखील वेगवेगळ्या आकाराचे प्रथिने एकमेकांपासून वेगळे करतील.

विभक्त गोंद 10% आणि 12% मधील फरक

तुमच्या लक्ष्यित प्रथिनांच्या आण्विक वजनानुसार, जर ते मोठे आण्विक वजन (60KD पेक्षा जास्त) असलेले प्रथिन असेल, तर तुम्ही 10% गोंद वापरू शकता, जर ते 60 आणि 30kd दरम्यान आण्विक वजन असलेले प्रथिन असेल, तर तुम्ही 12 वापरू शकता. % गोंद, आणि जर ते 30kd पेक्षा कमी असेल, तर मी सहसा 15% गोंद वापरतो.मुख्य मुद्दा असा आहे की जेव्हा इंडिकेटर लाइन फक्त रबरच्या तळातून बाहेर पडते, तेव्हा तुमचे लक्ष्य प्रोटीन रबरच्या अगदी मध्यभागी असू शकते.

जेलच्या वेगवेगळ्या एकाग्रतेशी संबंधित जेलचा छिद्र आकार देखील भिन्न आहे.लहान एकाग्रतेसह छिद्राचा आकार मोठा असतो आणि मोठ्या एकाग्रतेसह छिद्र आकार लहान असतो.साधारणपणे, सेपरेशन जेल 12% असते आणि एकाग्र जेल 5% असते, कारण एकाग्र जेलचा उद्देश सर्व प्रथिने एकाच सुरुवातीच्या ओळीवर केंद्रित करणे आणि नंतर विभक्त होण्यासाठी पृथक्करण जेल प्रविष्ट करणे हा आहे.प्रथिने आकारावर अवलंबून.