ความแตกต่างระหว่างเจลเข้มข้นและเจลแยกส่วน

แยกออกจากกัน และจุดไอโซอิเล็กทริกของ Gly คือ 6.0มีเพียงไม่กี่ชนิดเท่านั้นที่แตกตัวออกเป็นไอออนลบ ซึ่งเคลื่อนที่ช้ามากในสนามไฟฟ้าโปรตีนที่เป็นกรดจะแยกตัวออกเป็นไอออนลบที่ค่า pH นี้ และอัตราการย้ายของไอออนทั้งสามชนิดคือ cl > โปรตีนทั่วไป > Glyหลังจากอิเล็กโตรโฟรีซิสเริ่มต้นขึ้น ไอออน Cl จะเคลื่อนที่อย่างรวดเร็ว ทิ้งบริเวณที่มีความเข้มข้นของไอออนต่ำไว้เบื้องหลังGly เคลื่อนที่ช้ามากในสนามไฟฟ้า ส่งผลให้ไม่มีไอออนเคลื่อนที่ ดังนั้นบริเวณไฟฟ้าแรงสูงที่ไม่มีไอออนจึงเกิดขึ้นระหว่างไอออนเร็วและไอออนช้าไอออนลบทั้งหมดในบริเวณไฟฟ้าแรงสูงจะเร่งการเคลื่อนที่เมื่อพวกมันเคลื่อนที่ไปยังบริเวณ Cl ไอออน ไฟฟ้าแรงสูงจะหายไป และความเร็วในการเคลื่อนที่ของโปรตีนจะช้าลงหลังจากสร้างสถานะเสถียรข้างต้นแล้ว ตัวอย่างโปรตีนจะถูกทำให้เข้มข้นระหว่างไอออนเร็วและไอออนช้าเพื่อสร้าง interlayer ที่แคบ มันถูกจัดเรียงเป็นแถบตามปริมาณของประจุลบที่บรรทุกโดยโปรตีนหลังจากที่ตัวอย่างเข้มข้นเข้าสู่เจลแยกสารจากเจลเข้มข้น ค่า pH ของเจลจะเพิ่มขึ้น ระดับการแยกตัวของ Gly เพิ่มขึ้น และความคล่องตัวเพิ่มขึ้นนอกจากนี้ เนื่องจากโมเลกุลมีขนาดเล็ก จึงมีปริมาณมากกว่าโมเลกุลของโปรตีนทั้งหมดทันทีหลังจาก Cl ไอออนย้าย ความเข้มข้นของไอออนต่ำจะไม่มีอยู่อีกต่อไป ทำให้เกิดความแรงของสนามไฟฟ้าคงที่ดังนั้น การแยกตัวอย่างโปรตีนในเจลแยกจึงขึ้นอยู่กับคุณสมบัติของประจุ ขนาดโมเลกุล และรูปร่างเป็นหลักขนาดรูพรุนของเจลแยกมีขนาดที่แน่นอนสำหรับโปรตีนที่มีมวลสัมพัทธ์ต่างกัน ผลฮิสเทรีซิสที่ได้รับเมื่อผ่านจะแตกต่างกันแม้แต่อนุภาคที่มีประจุไฟฟ้าสถิตเท่ากันก็สามารถแยกโปรตีนที่มีขนาดต่างกันออกจากกันได้เนื่องจากผลของตะแกรงโมเลกุลนี้

ความแตกต่างระหว่าง 10% และ 12% ของกาวที่แยกจากกัน

ตามน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีนเป้าหมายของคุณ หากเป็นโปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลมากกว่า (มากกว่า 60KD) คุณสามารถใช้กาว 10% หากเป็นโปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลระหว่าง 60 ถึง 30kd คุณสามารถใช้ 12 % กาว และถ้าต่ำกว่า 30kd ฉันมักจะใช้กาว 15%ประเด็นหลักคือเมื่อเส้นตัวบ่งชี้วิ่งออกมาจากก้นยาง โปรตีนเป้าหมายของคุณอาจอยู่ตรงกลางยาง

ขนาดรูพรุนของเจลที่สอดคล้องกับความเข้มข้นของเจลที่แตกต่างกันก็แตกต่างกันเช่นกันขนาดรูพรุนที่มีความเข้มข้นน้อยจะมีขนาดใหญ่ และขนาดรูพรุนที่มีความเข้มข้นมากจะมีขนาดเล็กโดยทั่วไป เจลแยกจะอยู่ที่ 12% และเจลเข้มข้นคือ 5% เนื่องจากจุดประสงค์ของเจลเข้มข้นคือการรวมโปรตีนทั้งหมดไว้ที่เส้นเริ่มต้นเดียวกัน จากนั้นจึงป้อนเจลแยกเพื่อแยกขึ้นอยู่กับขนาดของโปรตีน