Разница между концентрированным гелем иразделительный гель
Значение рН концентрированного геля отличается от значения рН геля для разделения.Первый в основном проявляет эффект концентрации, тогда как последний проявляет эффект заряда и эффект молекулярного сита.Эффект концентрации в основном завершается в концентрированном геле.рН концентрированного геля составляет 6,8.При таком значении pH почти все ионы Cl HCl в буфере растворяются.
диссоциирован, а изоэлектрическая точка Gly равна 6,0.Лишь немногие диссоциируют на отрицательные ионы, которые очень медленно движутся в электрическом поле.Кислые белки при этом рН диссоциируют на отрицательные ионы, и скорость миграции трех типов ионов составляет cl > Общие белки > Gly.После начала электрофореза ионы Cl быстро перемещаются, оставляя позади область с низкой концентрацией ионов.Gly очень медленно движется в электрическом поле, что приводит к недостатку движущихся ионов, поэтому между быстрыми и медленными ионами образуется область высокого напряжения, в которой отсутствуют ионы.Все отрицательные ионы в области высокого напряжения будут ускорять свое движение.Когда они перемещаются в область иона Cl, высокое напряжение исчезает, и скорость движения белка замедляется.После установления вышеуказанного стабильного состояния образец белка концентрируется между быстрыми и медленными ионами с образованием узкой прослойки. Он распределяется в полосы в соответствии с количеством отрицательного заряда, переносимого белком.После попадания концентрированного образца в разделительный гель от концентрированного геля повышается рН геля, увеличивается степень диссоциации Gly и повышается подвижность.Более того, поскольку его молекула мала, он превосходит все молекулы белка.Сразу после миграции ионов Cl низкая концентрация ионов больше не существует, образуя постоянную напряженность электрического поля.Следовательно, разделение образцов белка в разделительном геле в основном зависит от свойств его заряда, размера и формы молекулы.Размер пор разделительного геля имеет определенный размер.Для белков с разной относительной массой эффект гистерезиса, получаемый при прохождении, разный.Даже частицы с одинаковыми статическими зарядами будут отделять друг от друга белки разного размера благодаря эффекту этого молекулярного сита.
Разница между 10% и 12% отделяющегося клея
В зависимости от молекулярной массы вашего целевого белка, если это белок с большей молекулярной массой (выше 60 кД), вы можете использовать 10% клей, если это белок с молекулярной массой от 60 до 30 кД, вы можете использовать 12 % клея, а если ниже 30кд, я обычно использую 15% клей.Суть в том, что, когда индикаторная линия едва заканчивается на дне резины, ваш целевой белок может находиться как раз в середине резины.
Размер пор геля, соответствующий различным концентрациям геля, также различен.Размер пор при малой концентрации большой, а размер пор при большой концентрации мал.Как правило, разделительный гель составляет 12%, а концентрированный гель - 5%, потому что цель концентрированного геля - сконцентрировать все белки на одной и той же стартовой линии, а затем ввести разделительный гель для разделения.В зависимости от размера белка.
Время публикации: 05 сентября 2022 г.
