Різниця між концентрованим гелем і гелем для розділення

дисоційований, а ізоелектрична точка Gly становить 6,0.Лише деякі дисоціюють на негативні іони, які дуже повільно рухаються в електричному полі.Кислі білки дисоціюють на негативні іони при цьому pH, і швидкість міграції трьох типів іонів становить cl > Загальні білки > Gly.Після початку електрофорезу іони Cl швидко рухаються, залишаючи позаду область з низькою концентрацією іонів.Gly дуже повільно рухається в електричному полі, що призводить до відсутності рухомих іонів, тому між швидкими та повільними іонами утворюється область високої напруги без іонів.Усі негативні іони в області високої напруги прискорять свій рух.Коли вони переміщуються в область іонів Cl, висока напруга зникає, і швидкість руху білка сповільнюється.Після встановлення вищезазначеного стабільного стану зразок білка концентрується між швидкими та повільними іонами, щоб утворити вузький прошарок, який розподіляється на смуги відповідно до кількості негативного заряду, який несе білок.Після того, як концентрований зразок потрапляє в розділовий гель від концентрованого гелю, pH гелю підвищується, ступінь дисоціації Gly збільшується, а рухливість підвищується.Крім того, оскільки його молекула мала, він перевищує всі молекули білка.Відразу після міграції іонів Cl низька концентрація іонів більше не існує, утворюючи постійну напруженість електричного поля.Таким чином, розділення зразків білка в розділювальному гелі в основному залежить від властивостей його заряду, молекулярного розміру та форми.Розмір пор розділового гелю має певний розмір.Для білків з різною відносною масою ефект гістерезису, отриманий при проходженні, різний.Навіть частинки з однаковими статичними зарядами будуть відокремлювати білки різного розміру один від одного завдяки ефекту цього молекулярного сита.

Різниця між 10% і 12% розділового клею

Відповідно до молекулярної маси цільового білка, якщо це білок з більшою молекулярною масою (понад 60 кД), ви можете використовувати 10% клею, якщо це білок з молекулярною масою від 60 до 30 кД, ви можете використовувати 12 % клею, а якщо він нижчий за 30 кд, я зазвичай використовую 15 % клею.Основний момент полягає в тому, що коли лінія індикатора закінчується гумовим дном, ваш цільовий білок може бути просто посередині гуми.

Розмір пор гелю, що відповідає різним концентраціям гелю, також різний.Розмір пор з малою концентрацією великий, а розмір пор з великою концентрацією малий.Як правило, роздільний гель становить 12%, а концентрований гель – 5%, тому що мета концентрованого гелю полягає в тому, щоб сконцентрувати всі білки на тій самій стартовій лінії, а потім увійти в роздільний гель для поділу.Залежно від розміру білка.