مرتکز جیل اور علیحدگی جیل کے درمیان فرق

الگ الگ، اور Gly کا آئیسو الیکٹرک پوائنٹ 6.0 ہے۔صرف چند ہی منفی آئنوں میں منقسم ہوتے ہیں، جو برقی میدان میں بہت آہستہ حرکت کرتے ہیں۔تیزابی پروٹین اس pH پر منفی آئنوں میں منقسم ہو جاتے ہیں، اور تین قسم کے آئنوں کی منتقلی کی شرح cl > عمومی پروٹین > Gly ہے۔الیکٹروفورسس شروع ہونے کے بعد، Cl آئن تیزی سے حرکت کرتے ہیں، جس سے آئن کا کم ارتکاز علاقہ پیچھے رہ جاتا ہے۔گلی برقی میدان میں بہت آہستہ حرکت کرتی ہے، جس کے نتیجے میں حرکت پذیر آئنوں کی کمی ہوتی ہے، اس لیے تیز اور سست آئنوں کے درمیان ایک ہائی وولٹیج کا خطہ بنتا ہے جس میں آئنوں کی کمی ہوتی ہے۔ہائی وولٹیج والے خطے میں تمام منفی آئن اپنی حرکت کو تیز کریں گے۔جب وہ Cl ion کے علاقے میں جاتے ہیں، تو ہائی وولٹیج غائب ہو جاتا ہے، اور پروٹین کی حرکت کی رفتار کم ہو جاتی ہے۔مندرجہ بالا مستحکم حالت کے قائم ہونے کے بعد، پروٹین کا نمونہ تیز اور سست آئنوں کے درمیان مرتکز ہو کر ایک تنگ انٹر لیئر بناتا ہے، اسے پروٹین کے ذریعے لے جانے والے منفی چارج کی مقدار کے مطابق بینڈوں میں ترتیب دیا جاتا ہے۔مرتکز نمونے کے مرتکز جیل سے علیحدگی جیل میں داخل ہونے کے بعد، جیل کا پی ایچ بڑھ جاتا ہے، گلی کی علیحدگی کی ڈگری بڑھ جاتی ہے، اور نقل و حرکت بڑھ جاتی ہے۔مزید یہ کہ اس کا مالیکیول چھوٹا ہونے کی وجہ سے یہ تمام پروٹین مالیکیولز سے زیادہ ہے۔Cl آئنوں کے ہجرت کے فوراً بعد، کم آئن کا ارتکاز اب موجود نہیں رہتا، جو ایک مستقل برقی میدان کی طاقت بناتا ہے۔لہذا، علیحدگی جیل میں پروٹین کے نمونوں کی علیحدگی بنیادی طور پر اس کے چارج کی خصوصیات، سالماتی سائز اور شکل پر منحصر ہے۔علیحدگی جیل کا تاکنا سائز ایک خاص سائز کا ہوتا ہے۔مختلف رشتہ دار ماس والے پروٹین کے لیے، گزرنے پر حاصل ہونے والا ہسٹریسس اثر مختلف ہوتا ہے۔برابر جامد چارجز والے ذرات بھی اس سالماتی چھلنی کے اثر کی وجہ سے مختلف سائز کے پروٹین کو ایک دوسرے سے الگ کر دیں گے۔

الگ کرنے والے گلو کے 10% اور 12% کے درمیان فرق

آپ کے ہدف والے پروٹین کے مالیکیولر وزن کے مطابق، اگر یہ ایک پروٹین ہے جس کا مالیکیولر وزن (60KD سے زیادہ) ہے، تو آپ 10% گوند استعمال کر سکتے ہیں، اگر یہ 60 اور 30kd کے درمیان مالیکیولر وزن والا پروٹین ہے، تو آپ 12 فیصد گلو استعمال کر سکتے ہیں۔ % گلو، اور اگر یہ 30kd سے کم ہے تو میں عام طور پر 15% گلو استعمال کرتا ہوں۔اہم نکتہ یہ ہے کہ جب اشارے کی لکیر صرف ربڑ کے نیچے سے نکل جاتی ہے، تو آپ کا ہدف پروٹین ربڑ کے بالکل درمیان میں ہو سکتا ہے۔

جیل کے مختلف ارتکاز کے مطابق جیل کا تاکنا سائز بھی مختلف ہے۔چھوٹے ارتکاز کے ساتھ تاکنا کا سائز بڑا ہے، اور بڑے ارتکاز کے ساتھ تاکنا کا سائز چھوٹا ہے۔عام طور پر، علیحدگی جیل 12٪ ہے اور مرتکز جیل 5٪ ہے، کیونکہ مرتکز جیل کا مقصد تمام پروٹینوں کو ایک ہی ابتدائی لائن پر مرکوز کرنا ہے، اور پھر علیحدگی کے لئے علیحدگی جیل داخل کرنا ہے.پروٹین کے سائز پر منحصر ہے۔