Különbség a koncentrált gél és az elválasztó gél között

disszociált, és a Gly izoelektromos pontja 6,0.Csak néhány disszociál negatív ionokká, amelyek nagyon lassan mozognak az elektromos térben.A savas fehérjék negatív ionokká disszociálnak ezen a pH-n, és a háromféle ion migrációs sebessége cl > Általános fehérjék > Gly.Az elektroforézis megkezdése után a Cl-ionok gyorsan mozognak, alacsony ionkoncentrációjú területet hagyva maguk után.A Gly nagyon lassan mozog az elektromos térben, ami a mozgó ionok hiányát eredményezi, így a gyors és lassú ionok között ionhiányos nagyfeszültségű tartomány alakul ki.A nagyfeszültségű tartományban lévő összes negatív ion felgyorsítja a mozgását.Amikor a Cl ion régióba költöznek, a magas feszültség megszűnik, és a fehérje mozgási sebessége lelassul.A fenti stabil állapot létrejötte után a fehérjemintát gyors és lassú ionok között koncentrálják, hogy keskeny közbenső réteget képezzenek, és a fehérje által hordozott negatív töltés mértékének megfelelően sávokba rendeződjenek.Miután a koncentrált minta a koncentrált gélből az elválasztó gélbe kerül, a gél pH-ja megemelkedik, a Gly disszociációs foka nő, a mobilitás nő.Sőt, mivel molekulája kicsi, meghaladja az összes fehérjemolekulát.Közvetlenül a Cl-ionok migrációja után az alacsony ionkoncentráció már nem létezik, állandó elektromos térerősséget képezve.Ezért a fehérjeminták szétválasztása az elválasztógélben elsősorban annak töltési tulajdonságaitól, molekulaméretétől és alakjától függ.Az elválasztó gél pórusmérete bizonyos méretű.Különböző relatív tömegű fehérjék esetében az áthaladáskor kapott hiszterézis hatás eltérő.Még az egyenlő statikus töltésű részecskék is elválasztják egymástól a különböző méretű fehérjéket a molekulaszita hatására.

Az elválasztó ragasztó 10% és 12% közötti különbsége

A célfehérje molekulatömege szerint, ha nagyobb molekulatömegű (60 KD feletti) fehérjéről van szó, akkor 10% ragasztót használhat, ha 60 és 30 kd közötti molekulatömegű fehérjét, akkor 12-t. %-os ragasztót, ha pedig 30kd-nál kisebb, akkor 15%-os ragasztót szoktam használni.A lényeg az, hogy amikor az indikátorvonal éppen kifogy a gumi alsóból, a célfehérje a gumi közepén lehet.

A gél különböző koncentrációinak megfelelő pórusmérete is eltérő.A pórusméret kis koncentráció esetén nagy, és a pórusméret nagy koncentráció esetén kicsi.Általában az elválasztó gél 12%, a koncentrált gél 5%, mivel a koncentrált gél célja, hogy minden fehérjét ugyanazon a kiindulási vonalon koncentráljon, majd az elválasztó gélbe kerüljön elválasztásra.A fehérje méretétől függően.