Diferència entre gel concentrat i gel de separació

dissociat i el punt isoelèctric de Gly és 6,0.Només uns quants es dissocien en ions negatius, que es mouen molt lentament en el camp elèctric.Les proteïnes àcides es dissocien en ions negatius a aquest pH, i la velocitat de migració dels tres tipus d'ions és cl > Proteïnes generals > Gly.Després de començar l'electroforesi, els ions Cl es mouen ràpidament, deixant enrere una àrea de concentració d'ions baixa.Gly es mou molt lentament en el camp elèctric, donant lloc a la manca d'ions en moviment, de manera que es forma una regió d'alta tensió sense ions entre ions ràpids i lents.Tots els ions negatius de la regió d'alta tensió acceleraran el seu moviment.Quan es mouen a la regió d'ions Cl, l'alta tensió desapareix i la velocitat de moviment de la proteïna s'alenteix.Un cop establert l'estat estable anterior, la mostra de proteïna es concentra entre ions ràpids i lents per formar una capa intermèdia estreta, es disposa en bandes segons la quantitat de càrrega negativa que porta la proteïna.Després que la mostra concentrada entri al gel de separació del gel concentrat, el pH del gel augmenta, el grau de dissociació de Gly augmenta i la mobilitat augmenta.A més, com que la seva molècula és petita, supera totes les molècules de proteïnes.Immediatament després de la migració dels ions Cl, la baixa concentració d'ions ja no existeix, formant una intensitat de camp elèctric constant.Per tant, la separació de mostres de proteïnes al gel de separació depèn principalment de les seves propietats de càrrega, mida molecular i forma.La mida dels porus del gel de separació té una mida determinada.Per a proteïnes amb massa relativa diferent, l'efecte d'histèresi rebut en passar és diferent.Fins i tot les partícules amb càrregues estàtiques iguals separaran proteïnes de diferents mides entre si a causa de l'efecte d'aquest tamís molecular.

Diferència entre el 10% i el 12% de cola separadora

Segons el pes molecular de la proteïna objectiu, si es tracta d'una proteïna amb un pes molecular més gran (per sobre de 60KD), podeu utilitzar cola del 10%, si és una proteïna amb un pes molecular entre 60 i 30kd, podeu utilitzar 12 % de cola, i si és inferior a 30 kd, normalment faig servir un 15% de cola.El punt principal és que quan la línia indicadora acaba de sortir del fons de goma, la proteïna objectiu pot estar just al mig de la goma.

La mida dels porus del gel corresponent a diferents concentracions de gel també és diferent.La mida dels porus amb una concentració petita és gran i la mida dels porus amb una gran concentració és petita.En general, el gel de separació és del 12% i el gel concentrat és del 5%, perquè el propòsit del gel concentrat és concentrar totes les proteïnes a la mateixa línia de partida i, a continuació, introduir el gel de separació per a la separació.Segons la mida de la proteïna.