Gwahaniaeth rhwng gel crynodedig a gel gwahanu

datgysylltiedig, a phwynt isoelectric Gly yw 6.0.Dim ond ychydig sy'n cael eu daduno'n ïonau negatif, sy'n symud yn araf iawn yn y maes trydan.Mae proteinau asidig yn cael eu daduno'n ïonau negatif ar y pH hwn, a chyfradd mudo'r tri math o ïon yw cl > Proteinau cyffredinol > Gly.Ar ôl i'r electrofforesis ddechrau, mae ïonau Cl yn symud yn gyflym, gan adael ardal crynodiad ïon isel ar ôl.Mae Gly yn symud yn araf iawn yn y maes trydan, gan arwain at ddiffyg ïonau symudol, felly mae rhanbarth foltedd uchel heb ïonau yn cael ei ffurfio rhwng ïonau cyflym ac araf.Bydd yr holl ïonau negyddol yn y rhanbarth foltedd uchel yn cyflymu eu symudiad.Pan fyddant yn symud i'r rhanbarth ïon Cl, mae'r foltedd uchel yn diflannu, ac mae cyflymder symud y protein yn arafu.Ar ôl sefydlu'r cyflwr sefydlog uchod, mae'r sampl protein wedi'i grynhoi rhwng ïonau cyflym ac araf i ffurfio interlayer cul, Fe'i trefnir yn fandiau yn ôl swm y tâl negyddol a gludir gan y protein.Ar ôl i'r sampl crynodedig fynd i mewn i'r gel gwahanu o'r gel crynodedig, mae pH y gel yn codi, mae gradd daduniad Gly yn cynyddu, ac mae'r symudedd yn codi.Ar ben hynny, oherwydd bod ei moleciwl yn fach, mae'n fwy na'r holl moleciwlau protein.Yn syth ar ôl i ïonau Cl ymfudo, nid yw'r crynodiad ïon isel yn bodoli mwyach, gan ffurfio cryfder maes trydan cyson.Felly, Mae gwahanu samplau protein yn y gel gwahanu yn bennaf yn dibynnu ar ei briodweddau tâl, maint moleciwlaidd a siâp.Mae maint mandwll y gel gwahanu maint penodol.Ar gyfer proteinau â màs cymharol gwahanol, mae'r effaith hysteresis a dderbynnir wrth basio yn wahanol.Bydd hyd yn oed gronynnau â gwefr statig cyfartal yn gwahanu proteinau o wahanol feintiau oddi wrth ei gilydd oherwydd effaith y rhidyll moleciwlaidd hwn.

Gwahaniaeth rhwng 10% a 12% o wahanu glud

Yn ôl pwysau moleciwlaidd eich protein targed, os yw'n brotein â phwysau moleciwlaidd mwy (uwchlaw 60KD), gallwch ddefnyddio glud 10%, os yw'n brotein â phwysau moleciwlaidd rhwng 60 a 30kd, gallwch ddefnyddio 12 % glud, ac os yw'n is na 30kd, fel arfer rwy'n defnyddio glud 15%.Y prif bwynt yw pan fydd y llinell ddangosydd yn rhedeg allan o'r gwaelod rwber, gall eich protein targed fod yn union yng nghanol y rwber.

Mae maint mandwll y gel sy'n cyfateb i wahanol grynodiadau o gel hefyd yn wahanol.Mae'r maint mandwll gyda chrynodiad bach yn fawr, ac mae'r maint pore â chrynodiad mawr yn fach.Yn gyffredinol, mae'r gel gwahanu yn 12% ac mae'r gel crynodedig yn 5%, oherwydd pwrpas y gel crynodedig yw canolbwyntio'r holl broteinau ar yr un llinell gychwyn, ac yna mynd i mewn i'r gel gwahanu i'w wahanu.Yn dibynnu ar faint y protein.