Skillnad mellan koncentrerad gel och separationsgel

dissocierad, och den isoelektriska punkten för Gly är 6,0.Endast ett fåtal dissocieras till negativa joner, som rör sig mycket långsamt i det elektriska fältet.Sura proteiner dissocieras till negativa joner vid detta pH, och migrationshastigheten för de tre typerna av joner är cl > Allmänna proteiner > Gly.Efter att elektroforesen startar rör sig Cl-joner snabbt och lämnar ett område med låg jonkoncentration bakom sig.Gly rör sig mycket långsamt i det elektriska fältet, vilket resulterar i avsaknaden av rörliga joner, så ett högspänningsområde som saknar joner bildas mellan snabba och långsamma joner.Alla negativa joner i högspänningsområdet kommer att påskynda sin rörelse.När de flyttar till Cl-jonregionen försvinner högspänningen och proteinets rörelsehastighet saktar ner.Efter att ovanstående stabila tillstånd har etablerats koncentreras proteinprovet mellan snabba och långsamma joner för att bilda ett smalt mellanskikt. Det arrangeras i band enligt mängden negativ laddning som bärs av proteinet.Efter att det koncentrerade provet kommer in i separationsgelen från den koncentrerade gelén, stiger gelens pH, dissociationsgraden för Gly ökar och rörligheten stiger.Dessutom, eftersom dess molekyl är liten, överstiger den alla proteinmolekyler.Omedelbart efter att Cl-joner har migrerat finns den låga jonkoncentrationen inte längre, vilket bildar en konstant elektrisk fältstyrka.Därför beror separationen av proteinprover i separationsgelen huvudsakligen på dess laddningsegenskaper, molekylstorlek och form.Separationsgelens porstorlek har en viss storlek.För proteiner med olika relativ massa är hystereseffekten som erhålls vid passering annorlunda.Även partiklar med lika statiska laddningar kommer att separera proteiner av olika storlekar från varandra på grund av effekten av denna molekylsikt.

Skillnad mellan 10% och 12% av separerande lim

Enligt molekylvikten för ditt målprotein, om det är ett protein med en högre molekylvikt (över 60KD), kan du använda 10% lim, om det är ett protein med en molekylvikt mellan 60 och 30kd, kan du använda 12 % lim, och är det lägre än 30kd brukar jag använda 15 % lim.Huvudpoängen är att när indikatorlinjen bara går ut ur gummibottnen kan ditt målprotein vara precis i mitten av gummit.

Porstorleken på gel som motsvarar olika koncentrationer av gel är också olika.Porstorleken med liten koncentration är stor, och porstorleken med stor koncentration är liten.Generellt är separationsgelen 12 % och den koncentrerade gelén 5 %, eftersom syftet med den koncentrerade gelén är att koncentrera alla proteiner på samma startlinje och sedan gå in i separationsgelen för separation.Beroende på proteinets storlek.