Diferença entre gel concentrado egel de separação
O valor de pH do gel concentrado é diferente do gel de separação.O primeiro mostra principalmente efeito de concentração, enquanto o último mostra efeito de carga e efeito de peneira molecular.O efeito de concentração é completado principalmente no gel concentrado.O pH do gel concentrado é 6,8.Sob esta condição de pH, quase todos os íons Cl de HCl no tampão são
dissociado, e o ponto isoelétrico de Gly é 6,0.Apenas alguns são dissociados em íons negativos, que se movem muito lentamente no campo elétrico.As proteínas ácidas são dissociadas em íons negativos neste pH, e a taxa de migração dos três tipos de íons é cl > Proteínas gerais > Gly.Após o início da eletroforese, os íons Cl movem-se rapidamente, deixando uma área de baixa concentração de íons para trás.Gly se move muito lentamente no campo elétrico, resultando na falta de íons em movimento, de modo que uma região de alta voltagem sem íons é formada entre os íons rápidos e lentos.Todos os íons negativos na região de alta voltagem irão acelerar seu movimento.Quando eles se movem para a região do íon Cl, a alta voltagem desaparece e a velocidade de movimento da proteína diminui.Depois que o estado estável acima é estabelecido, a amostra de proteína é concentrada entre íons rápidos e lentos para formar uma camada intermediária estreita. Ela é organizada em bandas de acordo com a quantidade de carga negativa transportada pela proteína.Depois que a amostra concentrada entra no gel de separação do gel concentrado, o pH do gel aumenta, o grau de dissociação de Gly aumenta e a mobilidade aumenta.Além disso, como sua molécula é pequena, ela supera todas as moléculas de proteína.Imediatamente após a migração dos íons Cl, a baixa concentração de íons não existe mais, formando um campo elétrico constante.Portanto, a separação de amostras de proteínas no gel de separação depende principalmente de suas propriedades de carga, tamanho molecular e forma.O tamanho dos poros do gel de separação tem um determinado tamanho.Para proteínas com massa relativa diferente, o efeito de histerese recebido ao passar é diferente.Mesmo partículas com cargas estáticas iguais separarão proteínas de tamanhos diferentes umas das outras devido ao efeito dessa peneira molecular.
Diferença entre 10% e 12% de cola separadora
De acordo com o peso molecular da sua proteína alvo, se for uma proteína com peso molecular maior (acima de 60KD), pode usar 10% de cola, se for uma proteína com peso molecular entre 60 e 30kd, pode usar 12 % de cola, e se for menor que 30kd, costumo usar 15% de cola.O ponto principal é que, quando a linha indicadora sai do fundo de borracha, sua proteína-alvo pode estar bem no meio da borracha.
O tamanho do poro do gel correspondente a diferentes concentrações de gel também é diferente.O tamanho do poro com pequena concentração é grande, e o tamanho do poro com grande concentração é pequeno.Geralmente, o gel de separação é de 12% e o gel concentrado é de 5%, porque o objetivo do gel concentrado é concentrar todas as proteínas na mesma linha de partida e depois entrar no gel de separação para separação.Dependendo do tamanho da proteína.
Horário da postagem: 05 de setembro de 2022
