Perbezaan antara gel pekat dangel pemisah
Nilai pH gel pekat adalah berbeza daripada gel pemisah.Yang pertama menunjukkan kesan kepekatan, manakala yang kedua menunjukkan kesan cas dan kesan ayak molekul.Kesan kepekatan terutamanya diselesaikan dalam gel pekat.pH gel pekat ialah 6.8.Di bawah keadaan pH ini, hampir semua ion Cl HCl dalam penimbal adalah
tercerai, dan titik isoelektrik Gly ialah 6.0.Hanya beberapa sahaja yang dipisahkan kepada ion negatif, yang bergerak sangat perlahan dalam medan elektrik.Protein berasid diasingkan kepada ion negatif pada pH ini, dan kadar penghijrahan ketiga-tiga jenis ion ialah cl > Protein am > Gly.Selepas elektroforesis bermula, ion Cl bergerak pantas, meninggalkan kawasan kepekatan ion yang rendah.Gly bergerak sangat perlahan dalam medan elektrik, mengakibatkan kekurangan ion yang bergerak, jadi kawasan voltan tinggi yang kekurangan ion terbentuk antara ion cepat dan lambat.Semua ion negatif di kawasan voltan tinggi akan mempercepatkan pergerakannya.Apabila mereka bergerak ke kawasan ion Cl, voltan tinggi hilang, dan kelajuan bergerak protein menjadi perlahan.Selepas keadaan stabil di atas ditubuhkan, sampel protein tertumpu di antara ion cepat dan perlahan untuk membentuk interlayer sempit, Ia disusun ke dalam jalur mengikut jumlah cas negatif yang dibawa oleh protein.Selepas sampel pekat memasuki gel pemisah daripada gel pekat, pH gel meningkat, tahap penceraian Gly meningkat, dan mobiliti meningkat.Lebih-lebih lagi, kerana molekulnya kecil, ia melebihi semua molekul protein.Sejurus selepas ion Cl berhijrah, kepekatan ion rendah tidak lagi wujud, membentuk kekuatan medan elektrik yang berterusan.Oleh itu, Pengasingan sampel protein dalam gel pengasingan terutamanya bergantung pada sifat cajnya, saiz molekul dan bentuknya.Saiz pori gel pemisah mempunyai saiz tertentu.Untuk protein dengan jisim relatif berbeza, kesan histerisis yang diterima apabila lulus adalah berbeza.Malah zarah dengan cas statik yang sama akan memisahkan protein yang berbeza saiz antara satu sama lain disebabkan oleh kesan penapis molekul ini.
Perbezaan antara 10% dan 12% gam pemisah
Mengikut berat molekul protein sasaran anda, jika ia adalah protein dengan berat molekul yang lebih besar (melebihi 60KD), anda boleh menggunakan gam 10%, jika ia adalah protein dengan berat molekul antara 60 dan 30kd, anda boleh menggunakan 12 % gam, dan jika ia lebih rendah daripada 30kd, saya biasanya menggunakan 15% gam.Perkara utama ialah apabila garis penunjuk hanya kehabisan bahagian bawah getah, protein sasaran anda boleh berada di tengah-tengah getah.
Saiz liang gel yang sepadan dengan kepekatan gel yang berbeza juga berbeza.Saiz liang dengan kepekatan kecil adalah besar, dan saiz liang dengan kepekatan besar adalah kecil.Secara amnya, gel pemisah adalah 12% dan gel pekat adalah 5%, kerana tujuan gel pekat adalah untuk menumpukan semua protein pada garis permulaan yang sama, dan kemudian masukkan gel pemisahan untuk pemisahan.Bergantung kepada saiz protein.
Masa siaran: Sep-05-2022
