केंद्रित जेल और जुदाई जेल के बीच अंतर

वियोजित है, और ग्लाइ का आइसोइलेक्ट्रिक बिंदु 6.0 है।केवल कुछ ही नकारात्मक आयनों में वियोजित होते हैं, जो विद्युत क्षेत्र में बहुत धीमी गति से चलते हैं।इस पीएच में अम्लीय प्रोटीन नकारात्मक आयनों में अलग हो जाते हैं, और तीन प्रकार के आयनों की प्रवासन दर सीएल> सामान्य प्रोटीन> ग्लाइ है।वैद्युतकणसंचलन शुरू होने के बाद, सीएल आयन तेजी से आगे बढ़ते हैं, कम आयन एकाग्रता क्षेत्र को पीछे छोड़ते हैं।विद्युत क्षेत्र में ग्लाइ बहुत धीमी गति से चलता है, जिसके परिणामस्वरूप गतिमान आयनों की कमी होती है, इसलिए तेज और धीमे आयनों के बीच आयनों की कमी वाला एक उच्च-वोल्टेज क्षेत्र बनता है।हाई-वोल्टेज क्षेत्र में सभी नकारात्मक आयन अपने आंदोलन को तेज करेंगे।जब वे Cl आयन क्षेत्र में जाते हैं, तो उच्च वोल्टेज गायब हो जाता है, और प्रोटीन की गति धीमी हो जाती है।उपरोक्त स्थिर स्थिति स्थापित होने के बाद, प्रोटीन का नमूना एक संकीर्ण इंटरलेयर बनाने के लिए तेज़ और धीमे आयनों के बीच केंद्रित होता है, इसे प्रोटीन द्वारा किए गए नकारात्मक चार्ज की मात्रा के अनुसार बैंड में व्यवस्थित किया जाता है।केंद्रित नमूना केंद्रित जेल से जुदाई जेल में प्रवेश करने के बाद, जेल का पीएच बढ़ जाता है, ग्लाइ की हदबंदी की डिग्री बढ़ जाती है, और गतिशीलता बढ़ जाती है।इसके अलावा, क्योंकि इसका अणु छोटा है, यह सभी प्रोटीन अणुओं से अधिक है।सीएल आयनों के पलायन के तुरंत बाद, कम आयन एकाग्रता अब मौजूद नहीं है, जिससे एक निरंतर विद्युत क्षेत्र की ताकत बनती है।इसलिए, पृथक्करण जेल में प्रोटीन के नमूनों का पृथक्करण मुख्य रूप से इसके आवेश गुणों, आणविक आकार और आकार पर निर्भर करता है।जुदाई जेल के ताकना आकार का एक निश्चित आकार होता है।अलग-अलग सापेक्ष द्रव्यमान वाले प्रोटीन के लिए, गुजरने पर प्राप्त हिस्टैरिसीस प्रभाव अलग होता है।समान स्थिर आवेश वाले कण भी इस आणविक छलनी के प्रभाव से विभिन्न आकार के प्रोटीन को एक दूसरे से अलग कर देंगे।

अलग करने वाले गोंद के 10% और 12% के बीच अंतर

आपके लक्षित प्रोटीन के आणविक भार के अनुसार, यदि यह एक बड़े आणविक भार (60KD से ऊपर) वाला प्रोटीन है, तो आप 10% गोंद का उपयोग कर सकते हैं, यदि यह 60 और 30kd के बीच आणविक भार वाला प्रोटीन है, तो आप 12 का उपयोग कर सकते हैं % गोंद, और अगर यह 30kd से कम है, तो मैं आमतौर पर 15% गोंद का उपयोग करता हूं।मुख्य बिंदु यह है कि जब सूचक रेखा रबर के तल से बाहर निकलती है, तो आपका लक्षित प्रोटीन रबर के ठीक बीच में हो सकता है।

जेल की विभिन्न सांद्रता के अनुरूप जेल का छिद्र आकार भी भिन्न होता है।छोटी सघनता वाले छिद्र का आकार बड़ा होता है, और बड़ी सघनता वाले ताकना का आकार छोटा होता है।आम तौर पर, जुदाई जेल 12% और केंद्रित जेल 5% होता है, क्योंकि केंद्रित जेल का उद्देश्य सभी प्रोटीनों को एक ही प्रारंभिक रेखा पर केंद्रित करना है, और फिर जुदाई के लिए जुदाई जेल में प्रवेश करना है।प्रोटीन के आकार पर निर्भर करता है।