Erinevus kontsentreeritud geeli ja eraldusgeeli vahel

dissotsieerunud ja Gly isoelektriline punkt on 6,0.Vaid vähesed on dissotsieerunud negatiivseteks ioonideks, mis liiguvad elektriväljas väga aeglaselt.Selle pH juures dissotsieeruvad happelised valgud negatiivseteks ioonideks ja kolme tüüpi ioonide migratsioonikiirus on cl > Üldvalgud > Gly.Pärast elektroforeesi algust liiguvad Cl ioonid kiiresti, jättes maha madala ioonikontsentratsiooniga ala.Gly liigub elektriväljas väga aeglaselt, mille tulemuseks on liikuvate ioonide puudumine, mistõttu tekib kiirete ja aeglaste ioonide vahele kõrgepingepiirkond, kus ioonid puuduvad.Kõik kõrgepingepiirkonna negatiivsed ioonid kiirendavad nende liikumist.Kui need liiguvad Cl ioonide piirkonda, kaob kõrge pinge ja valgu liikumiskiirus aeglustub.Pärast ülaltoodud stabiilse oleku kindlakstegemist kontsentreeritakse valguproov kiirete ja aeglaste ioonide vahele, moodustades kitsa vahekihi. See jaotatakse ribadeks vastavalt valgu poolt kantud negatiivse laengu kogusele.Pärast kontsentreeritud proovi sisenemist kontsentreeritud geelist eraldusgeeli tõuseb geeli pH, Gly dissotsiatsiooniaste suureneb ja liikuvus suureneb.Veelgi enam, kuna selle molekul on väike, ületab see kõiki valgumolekule.Vahetult pärast Cl-ioonide migreerumist ei eksisteeri enam madalat ioonikontsentratsiooni, moodustades konstantse elektrivälja tugevuse.Seetõttu sõltub valguproovide eraldamine eraldusgeelis peamiselt selle laenguomadustest, molekuli suurusest ja kujust.Eraldusgeeli pooride suurus on teatud suurusega.Erineva suhtelise massiga valkude puhul on läbimisel saadav hüstereesiefekt erinev.Isegi võrdse staatilise laenguga osakesed eraldavad selle molekulaarsõela mõjul üksteisest erineva suurusega valgud.

Erinevus 10% ja 12% eraldusliimi vahel

Vastavalt teie sihtvalgu molekulmassile, kui see on suurema molekulmassiga valk (üle 60 kD), võite kasutada 10% liimi, kui see on valk molekulmassiga vahemikus 60 kuni 30 kd, võite kasutada 12. % liimi ja kui see on alla 30kd, siis kasutan tavaliselt 15% liimi.Peaasi on see, et kui indikaatorjoon saab just kummipõhjast otsa, võib teie sihtvalk olla just kummi keskel.

Erinevatele geelikontsentratsioonidele vastav geeli pooride suurus on samuti erinev.Väikese kontsentratsiooniga pooride suurus on suur ja suure kontsentratsiooniga pooride suurus on väike.Üldiselt on eraldusgeel 12% ja kontsentreeritud geel 5%, kuna kontsentreeritud geeli eesmärk on kontsentreerida kõik valgud samale lähtejoonele ja seejärel siseneda eraldamiseks eraldusgeeli.Olenevalt valgu suurusest.