استعمال ڪريوجدائي گلو
استعمال ۽ عام مسئلا:
1) فلٽر پيپر، گلو ۽ جھلي جي وچ ۾ سائيز عام طور تي فلٽر پيپر > = جھلي > = گلو آھي.
2) فلٽر پيپر، گلو ۽ جھلي جي وچ ۾ ڪو به بلبل نه هجڻ گهرجي، جيڪو شارٽ سرڪٽ جو سبب بڻجندو.
3) جھلي جي hydrophobicity جي ڪري، جھلي کي پهريان مڪمل طور تي ميٿانول ۾ ويٽ ڪيو وڃي.ان کان سواء، فلم کي ايندڙ آپريشن ۾ هر وقت گندي رکڻ گهرجي (سواء خشڪ فلم جي طريقي جي).
4) فلٽر پيپر ٻيهر استعمال ڪري سگھجي ٿو.مٿئين فلٽر پيپر (ممبرين) ۾ ڪيترائي منتقل ٿيل پروٽين جذب ٿيل آهن، تنهنڪري مٿئين ۽ هيٺين فلٽر پيپرز کي نه ملايو وڃي.جيڪڏهن اهي فرق نه ٿا ڪري سگهن، ربر فلٽر پيپر کي تبديل ڪري سگهجي ٿو.
5) منتقلي جو وقت عام طور تي 1.5 ڪلاڪ آهي، (1ma-2ma / cm2، 10٪ gel)، ۽ منتقلي جو وقت ۽ موجوده ماليڪيولر وزن جي مطابق ترتيب ڏئي سگهجي ٿو.
1) جڏهن ليمينيٽنگ فلم، گلو ۽ پيپر سينڊوچ، هڪ گھمڻ واري فلم بفر سان وڏي پليٽ ۾ هلائي.اسٽيڪ ڪرڻ کان پوء، ٽن کي منتقل ڪريو گھمڻ واري فلم ڊوائيس تي متوازي ۾.انهن کي وڌيڪ نه هلايو، ڇاڪاڻ ته بفر ۾ ڪم ڪرڻ سان بلبلن جو امڪان مڪمل طور تي ختم ٿي چڪو آهي، تنهنڪري بلبل کي هلائڻ جي ڪا ضرورت ناهي.
2) فلم جي منتقلي جي وقت بابت: 20 وي سيمي سڪل گردش لاءِ × 30 منٽ
(b) گلي جو طريقو
اسان بنيادي طور تي هي طريقو استعمال نٿا ڪريون، تنهنڪري اسان ان کي هتي متعارف نه ڪنداسين.
سي ميٽاساسس کان پوء اثر جي سڃاڻپ
1. گلو رنگڻ
Coomassie شاندار نيري سان داغ ڪرڻ ۽ Destain سان رنگ ڪرڻ کان پوء، ڏسو ته ڇا اڃا تائين گلو تي پروٽين موجود آهي منتقلي جي اثر کي ظاهر ڪرڻ لاء.
2. ڊائي فلم
رنگن جا ٻه قسم آهن حل، واپسي ۽ ناقابل واپسي.موٽڻ وارن ۾ شامل آهن ponceau-s red, fastgreen FC, CPTs وغيره. انهن رنگن سان رنگڻ کان پوءِ، رنگ ڌوئي سگھجي ٿو، ۽ جھلي کي وڌيڪ تجزيو لاءِ استعمال ڪري سگھجي ٿو.پر ناقابل واپسي رنگ، جهڙوڪ Coomassie brilliant blue، India ink، amido Black 10B، وغيره، ۽ داغ واري فلم کي وڌيڪ تجزيي لاءِ استعمال نٿو ڪري سگهجي.
پوسٽ ٽائيم: سيپٽمبر-09-2022
