Menggunakanlem pemisah
ution dan masalah umum:
1) Ukuran antara kertas saring, lem dan membran umumnya adalah kertas saring > = membran > = lem.
2) Tidak boleh ada gelembung antara kertas saring, lem dan membran, yang akan menyebabkan korsleting.
3) Karena membran bersifat hidrofobik, membran harus terlebih dahulu dibasahi seluruhnya dalam metanol.Selain itu, film harus tetap basah setiap saat pada operasi selanjutnya (kecuali untuk metode film kering).
4) Kertas saring dapat digunakan kembali.Banyak protein transfer yang teradsorpsi pada kertas saring atas (membran), sehingga kertas saring atas dan bawah tidak boleh tercampur.Jika tidak dapat dibedakan, kertas saring karet dapat diganti.
5) Waktu transfer umumnya 1,5 jam, (1ma-2ma / cm2, 10% gel), dan waktu transfer dan arus dapat disesuaikan dengan berat molekul.
1) Saat melaminasi film, lem dan sandwich kertas, operasikan di piring besar dengan penyangga film berputar.Setelah menumpuk, pindahkan ketiganya ke perangkat film berputar secara paralel.Jangan pindahkan lagi, karena kemungkinan gelembung telah dihilangkan sepenuhnya dengan mengoperasikan buffer, jadi tidak perlu menggerakkan gelembung
2) Tentang waktu transfer film: 20 V untuk rotasi semi kering × 30 menit
(b) metode basah
Kami pada dasarnya tidak menggunakan metode ini, jadi kami tidak akan memperkenalkannya di sini.
C identifikasi efek setelah metastasis
1. Pencelupan lem
Setelah pewarnaan dengan Coomassie brilliant blue dan penghilangan warna dengan Destain, lihat apakah masih ada protein pada lem untuk mencerminkan efek transfer.
2. Film pewarna
Ada dua jenis larutan pewarna, reversibel dan ireversibel.Yang dapat dibalik termasuk ponceau-s red, fastgreen FC, CPTs, dll. setelah pewarnaan dengan pewarna ini, pigmen dapat dibersihkan, dan membran dapat digunakan untuk analisis lebih lanjut.Tetapi pewarna ireversibel, seperti Coomassie brilliant blue, tinta India, amido Black 10B, dll., dan film yang diwarnai tidak dapat digunakan untuk analisis lebih lanjut.
Waktu posting: Sep-09-2022
