Uporabaločilno lepilo
težave in pogoste težave:
1) Velikost med filtrirnim papirjem, lepilom in membrano je na splošno filtrirni papir > = membrana > = lepilo.
2) Med filtrirnim papirjem, lepilom in membrano ne sme biti mehurčkov, ki bi povzročili kratek stik.
3) Zaradi hidrofobnosti membrane je treba membrano najprej popolnoma namočiti v metanolu.Poleg tega mora biti folija med nadaljnjo operacijo ves čas mokra (razen pri metodi suhega filma).
4) Filtrirni papir lahko ponovno uporabite.V zgornjem filtrirnem papirju (membrani) je adsorbiranih veliko prenesenih proteinov, zato se zgornji in spodnji filtrirni papir ne smeta mešati.Če jih ni mogoče ločiti, lahko gumijasti filtrirni papir zamenjate.
5) Čas prenosa je običajno 1,5 ure (1ma-2ma / cm2, 10% gel), čas prenosa in tok pa je mogoče prilagoditi glede na molekulsko maso.
1) Pri laminiranju folije, lepila in papirnatih sendvičev delajte v veliki plošči z vrtljivim pufrom za film.Po zlaganju vse tri vzporedno prenesite v napravo za vrtenje filma.Ne premikajte jih več, ker je z delovanjem v medpomnilniku popolnoma odpravljena možnost nastanka mehurčkov, zato mehurčkov ni treba poganjati.
2) O času prenosa filma: 20 V za polsuho vrtenje × 30 min
(b) mokra metoda
Te metode načeloma ne uporabljamo, zato je tukaj ne bomo predstavljali.
C identifikacija učinka po metastazah
1. Barvanje z lepilom
Po barvanju s Coomassie brilliant blue in razbarvanju z Destain preverite, ali je na lepilu še vedno beljakovina, ki odraža učinek prenosa.
2. Barvni film
Obstajata dve vrsti raztopin barvil, reverzibilne in ireverzibilne.Med reverzibilne spadajo ponceau-s red, fastgreen FC, CPTs itd. Po barvanju s temi barvili se pigment lahko spere in membrano uporabi za nadaljnjo analizo.Vendar ireverzibilnih barvil, kot so Coomassie brilliant blue, indijsko črnilo, amido črna 10B itd., in obarvanega filma ni mogoče uporabiti za nadaljnjo analizo.
Čas objave: 9. september 2022
