Izmantotatdalīšanas līme
problēmas un izplatītas problēmas:
1) Izmērs starp filtrpapīru, līmi un membrānu parasti ir filtrpapīrs > = membrāna > = līme.
2) Starp filtrpapīru, līmi un membrānu nedrīkst būt burbuļi, kas var izraisīt īssavienojumu.
3) Membrānas hidrofobitātes dēļ membrāna vispirms pilnībā jāsamitrina metanolā.Turklāt turpmākajā darbībā plēvei vienmēr jābūt mitrai (izņemot sausās plēves metodi).
4) Filtrpapīru var izmantot atkārtoti.Augšējā filtrpapīrā (membrānā) ir adsorbēts daudz pārnesto proteīnu, tāpēc augšējo un apakšējo filtrpapīru nedrīkst sajaukt.Ja tos nevar atšķirt, gumijas filtrpapīru var nomainīt.
5) Pārsūtīšanas laiks parasti ir 1,5 stundas (1ma-2ma / cm2, 10% želeja), un pārsūtīšanas laiku un strāvu var pielāgot atbilstoši molekulmasai.
1) Laminējot plēves, līmes un papīra sviestmaizes, darbojieties lielā plāksnē ar rotējošu plēves buferi.Pēc sakraušanas paralēli pārnesiet trīs uz rotējošās plēves ierīci.Nepārvietojiet tos vairāk, jo, darbojoties buferī, burbuļu iespējamība ir pilnībā novērsta, tāpēc nav jādzen burbuļi
2) Par filmas pārsūtīšanas laiku: 20 V pussausai rotācijai × 30 min
b) mitrā metode
Mēs šo metodi pamatā neizmantojam, tāpēc šeit to neieviesīsim.
C ietekmes noteikšana pēc metastāzēm
1. Līmes krāsošana
Pēc krāsošanas ar Coomassie briljantzilo un atkrāsošanas ar Destain pārbaudiet, vai uz līmes joprojām ir proteīns, kas atspoguļo pārneses efektu.
2. Krāsu plēve
Ir divu veidu krāsvielu šķīdumi, atgriezeniski un neatgriezeniski.Atgriezeniskie ir ponceau-s red, fastgreen FC, CPT uc pēc krāsošanas ar šīm krāsvielām pigmentu var nomazgāt un membrānu var izmantot turpmākai analīzei.Bet neatgriezeniskas krāsvielas, piemēram, Coomassie brilliant blue, Indijas tinte, amido Black 10B utt., un iekrāsoto plēvi nevar izmantot turpmākai analīzei.
Publicēšanas laiks: 09.09.2022
