Erabilibereizketa kola
arazoak eta ohiko arazoak:
1) Iragazki-paperaren, kolaren eta mintzaren arteko tamaina, oro har, iragazki-papera > = mintza > = kola da.
2) Iragazki-paperaren, kolaren eta mintzaren artean ez da burbuilarik egon behar, zirkuitulaburra eragingo duena.
3) Mintzaren hidrofobikotasuna dela eta, lehenik eta behin mintza guztiz busti behar da metanolean.Gainera, filma uneoro bustita mantendu behar da ondorengo eragiketan (film lehor metodoa izan ezik).
4) Iragazki-papera berrerabili daiteke.Goiko iragazki-paperean (mintzean) transferitutako proteina asko xurgatuta daude, beraz, goiko eta beheko iragazki-paperak ez dira nahastu behar.Ezin badira bereizten, gomazko iragazki-papera ordeztu daiteke.
5) Transferentzia-denbora, oro har, 1,5 ordukoa da (1ma-2ma / cm2, 10% gel), eta transferentzia-denbora eta korrontea pisu molekularraren arabera doitu daitezke.
1) Filma, kola eta paperezko ogitartekoak ijezteko orduan, funtzionatu plaka handi batean film-buffer birakariarekin.Pilatu ondoren, transferitu hirurak paraleloan biratzen diren film gailura.Ez itzazu gehiago mugitu, burbuilen aukera guztiz ezabatu delako bufferean funtzionatuz, beraz, ez dago burbuilak gidatu beharrik.
2) Filma transferitzeko denborari buruz: 20 V biraketa erdi lehorrako × 30min
(b) metodo hezea
Funtsean ez dugu metodo hau erabiltzen, beraz, ez dugu hemen aurkeztuko.
C metastasiaren ondoren efektuaren identifikazioa
1. Kola tindatzea
Coomassie urdin distiratsuarekin tindatu eta Destain-ekin koloreztatu ondoren, ikusi kola gainean proteinarik dagoen oraindik transferentziaren eragina islatzeko.
2. Tindatu filma
Bi tindagai-disoluzio mota daude, itzulezinak eta itzulezinak.Atzeragarri direnen artean, ponceau-s gorria, fastgreen FC, CPTak, etab. koloratzaile hauekin tindatu ondoren, pigmentua garbitu daiteke eta mintza analisi gehiago egiteko erabil daiteke.Baina koloratzaile itzulezinak, hala nola Coomassie urdin distiratsua, tinta indiarra, amido Black 10B, etab., eta zikindutako filma ezin dira analisi gehiago egiteko erabili.
Argitalpenaren ordua: 2022-09-09
