Utilizareadeziv de separare
utilități și probleme comune:
1) Dimensiunea dintre hârtia de filtru, adeziv și membrană este în general hârtie de filtru > = membrană > = adeziv.
2) Nu trebuie să existe bule între hârtia de filtru, adeziv și membrană, care vor cauza scurtcircuit.
3) Din cauza hidrofobicității membranei, membrana trebuie mai întâi umezită complet în metanol.În plus, filmul trebuie menținut umed în orice moment în operațiunea ulterioară (cu excepția metodei filmului uscat).
4) Hârtia de filtru poate fi reutilizată.Există multe proteine transferate adsorbite în hârtia de filtru superioară (membrană), astfel încât hârtiile de filtru superioare și inferioare nu trebuie amestecate.Dacă nu pot fi distinse, hârtia de filtru de cauciuc poate fi înlocuită.
5) Timpul de transfer este în general de 1,5 ore, (1ma-2ma / cm2, 10% gel), iar timpul de transfer și curentul pot fi ajustate în funcție de greutatea moleculară.
1) Când plasați filmul, lipiciul și sandvișurile din hârtie, operați într-o placă mare cu un tampon de film rotativ.După stivuire, transferați cele trei pe dispozitivul de film rotativ în paralel.Nu le mai mutați, deoarece posibilitatea de apariție a bulelor a fost complet eliminată prin operarea în buffer, deci nu este nevoie să conduceți bule.
2) Despre timpul de transfer al filmului: 20 V pentru rotație semi uscată × 30 min
(b) metoda umedă
Practic nu folosim această metodă, așa că nu o vom introduce aici.
C identificarea efectului după metastază
1. Vopsirea cu lipici
După colorarea cu albastru strălucitor Coomassie și decolorarea cu Destain, vezi dacă mai există proteine pe adeziv pentru a reflecta efectul transferului.
2. Vopsea film
Există două tipuri de soluții de colorare, reversibile și ireversibile.Cele reversibile includ ponceau-s red, fastgreen FC, CPT-uri etc. după vopsirea cu acești coloranți, pigmentul poate fi spălat, iar membrana poate fi folosită pentru analize ulterioare.Dar coloranții ireversibili, cum ar fi albastrul strălucitor Coomassie, cerneala indiană, amido Black 10B etc., și filmul colorat nu pot fi utilizați pentru analize ulterioare.
Ora postării: 09-09-2022
