ใช้กาวแยก
การใช้งานและปัญหาทั่วไป:
1) ขนาดระหว่างกระดาษกรอง กาว และเมมเบรน โดยทั่วไป กระดาษกรอง > = เมมเบรน > = กาว
2) ต้องไม่มีฟองอากาศระหว่างกระดาษกรอง กาว และเมมเบรน ซึ่งจะทำให้เกิดไฟฟ้าลัดวงจร
3) เนื่องจากความสามารถในการไม่ชอบน้ำของเมมเบรน เมมเบรนจะต้องถูกทำให้เปียกในเมทานอลก่อนนอกจากนี้ฟิล์มจะต้องเปียกตลอดเวลาในการใช้งานครั้งต่อไป (ยกเว้นวิธีฟิล์มแห้ง)
4) กระดาษกรองสามารถใช้ซ้ำได้กระดาษกรองด้านบน (เมมเบรน) มีโปรตีนถ่ายโอนจำนวนมากดูดซับอยู่ ดังนั้นกระดาษกรองด้านบนและด้านล่างจะต้องไม่ปะปนกันหากไม่สามารถแยกความแตกต่างได้ สามารถเปลี่ยนกระดาษกรองยางได้
5) เวลาการถ่ายโอนโดยทั่วไปคือ 1.5 ชั่วโมง (1ma-2ma / cm2, เจล 10%) และเวลาในการถ่ายโอนและกระแสสามารถปรับได้ตามน้ำหนักโมเลกุล
1) เมื่อเคลือบฟิล์ม กาว และกระดาษแซนวิช ทำงานในจานขนาดใหญ่ที่มีบัฟเฟอร์ฟิล์มหมุนหลังจากวางซ้อนกันแล้ว ให้ถ่ายโอนทั้งสามไปยังอุปกรณ์หมุนฟิล์มแบบขนานอย่าเคลื่อนย้ายอีกต่อไป เนื่องจากความเป็นไปได้ที่จะเกิดฟองอากาศถูกกำจัดไปหมดแล้วโดยการใช้งานในบัฟเฟอร์ ดังนั้นจึงไม่จำเป็นต้องขับฟองอากาศ
2) เกี่ยวกับเวลาในการถ่ายโอนฟิล์ม: 20 V สำหรับการหมุนกึ่งแห้ง × 30 นาที
(b) วิธีเปียก
โดยทั่วไปเราไม่ใช้วิธีนี้ ดังนั้นเราจะไม่แนะนำที่นี่
C การระบุผลกระทบหลังจากการแพร่กระจาย
1. การย้อมสีด้วยกาว
หลังจากการย้อมด้วยสีน้ำเงินสดใส Coomassie และการลดสีด้วย Destain ดูว่ายังมีโปรตีนบนกาวเพื่อสะท้อนผลของการถ่ายเทหรือไม่
2. ฟิล์มสี
น้ำยาย้อมมี 2 ชนิด คือแบบย้อนกลับได้และแบบกลับไม่ได้สีที่ผันกลับได้ ได้แก่ สีแดง ponseau, fastgreen FC, CPT เป็นต้น หลังจากย้อมด้วยสีย้อมเหล่านี้แล้ว เม็ดสีสามารถถูกชะล้างออกไปได้ และเยื่อกรองสามารถนำไปใช้ในการวิเคราะห์ต่อไปได้แต่สีย้อมที่ย้อมกลับไม่ได้ เช่น Coomassie บริลีทบลู, หมึกอินเดีย, amido Black 10B เป็นต้น และฟิล์มที่ย้อมนั้นไม่สามารถใช้ในการวิเคราะห์เพิ่มเติมได้
เวลาโพสต์: Sep-09-2022
