Usecola de separación
usos e problemas comúns:
1) O tamaño entre papel de filtro, cola e membrana é xeralmente papel de filtro > = membrana > = cola.
2) Non debe haber burbullas entre o papel de filtro, a cola e a membrana, o que provocará un curtocircuíto.
3) Debido á hidrofobicidade da membrana, primeiro debe mollarse completamente en metanol.Ademais, a película debe manterse húmida en todo momento na operación posterior (agás o método de película seca).
4) O papel de filtro pódese reutilizar.Hai moitas proteínas transferidas adsorbidas no papel de filtro superior (membrana), polo que non se deben mesturar os papeis de filtro superior e inferior.Se non se poden distinguir, pódese substituír o papel de filtro de goma.
5) O tempo de transferencia é xeralmente de 1,5 horas, (1ma-2ma / cm2, 10% de xel), e o tempo de transferencia e a corrente pódense axustar segundo o peso molecular.
1) Ao laminar sándwiches de película, cola e papel, opera nunha placa grande cun tampón de película rotativo.Despois de apilar, transfire os tres ao dispositivo de película xiratoria en paralelo.Non os moves máis, porque a posibilidade de burbullas foi completamente eliminada ao operar no buffer, polo que non hai que dirixir burbullas.
2) Sobre o tempo de transferencia da película: 20 V para rotación semi seca × 30 min
b) Método húmido
Basicamente non usamos este método, polo que non o presentaremos aquí.
C identificación do efecto despois da metástase
1. Tintura con cola
Despois de teñir con Coomassie azul brillante e decolorar con Destain, mira se aínda hai proteínas na cola para reflectir o efecto da transferencia.
2. Película de tintura
Hai dous tipos de solucións de colorantes, reversibles e irreversibles.Os reversibles inclúen o vermello ponceau, o FC verde rápido, os CPT, etc. despois de tinguirse con estes colorantes, o pigmento pódese lavar e a membrana pódese usar para unha análise posterior.Pero os colorantes irreversibles, como o azul brillante de Coomassie, a tinta china, o amido Black 10B, etc., e a película manchada non se poden usar para unha análise posterior.
Hora de publicación: 09-09-2022
