Použitíseparační lepidlo
řešení a běžné problémy:
1) Velikost mezi filtračním papírem, lepidlem a membránou je obecně filtrační papír > = membrána > = lepidlo.
2) Mezi filtračním papírem, lepidlem a membránou nesmí být žádné bubliny, které způsobí zkrat.
3) Kvůli hydrofobnosti membrány musí být membrána nejprve zcela navlhčena v methanolu.Kromě toho musí být fólie během následující operace neustále vlhká (kromě metody suchého filmu).
4) Filtrační papír lze znovu použít.V horním filtračním papíru (membráně) je adsorbováno mnoho přenesených proteinů, proto se horní a spodní filtrační papír nesmí míchat.Pokud je nelze rozlišit, lze pryžový filtrační papír vyměnit.
5) Doba přenosu je obecně 1,5 hodiny (1ma-2ma / cm2, 10% gel) a dobu přenosu a proud lze upravit podle molekulové hmotnosti.
1) Při laminování fólií, lepidel a papírových sendvičů pracujte na velké desce s rotujícím fóliovým nárazníkem.Po stohování přeneste tři paralelně do rotačního filmového zařízení.Již s nimi nepohybujte, protože možnost vzniku bublin byla zcela eliminována provozem v pufru, takže není potřeba bubliny hnat
2) Doba přenosu filmu: 20 V pro polosuchou rotaci × 30 min
b) mokrá metoda
Tuto metodu v podstatě nepoužíváme, proto ji zde nebudeme představovat.
C identifikace účinku po metastáze
1. Barvení lepidlem
Po obarvení Coomassie brilantní modří a odbarvení pomocí Destain zkontrolujte, zda je na lepidle ještě protein, který odráží efekt přenosu.
2. Barvicí film
Existují dva druhy roztoků barviv, vratné a nevratné.Mezi reverzibilní patří ponceau-s red, fastgreen FC, CPTs atd. po obarvení těmito barvivy lze pigment smýt a membránu použít pro další analýzu.Ale nevratná barviva, jako je Coomassie brilantní modř, indický inkoust, amido Black 10B atd., a obarvený film nelze použít pro další analýzu.
Čas odeslání: září 09-2022
