Использоватьразделительный клей
ции и общие проблемы:
1) Размер между фильтровальной бумагой, клеем и мембраной обычно составляет фильтровальную бумагу > = мембрана > = клей.
2) Между фильтровальной бумагой, клеем и мембраной не должно быть пузырей, которые могут вызвать короткое замыкание.
3) Из-за гидрофобности мембраны ее необходимо предварительно полностью смочить в метаноле.Кроме того, при последующей работе пленка должна быть все время влажной (за исключением метода сухой пленки).
4) Фильтровальную бумагу можно использовать повторно.На верхней фильтровальной бумаге (мембране) адсорбировано много переносимых белков, поэтому нельзя смешивать верхнюю и нижнюю фильтровальную бумагу.Если их невозможно различить, резиновый бумажный фильтр можно заменить.
5) Время переноса обычно составляет 1,5 часа (1 мА-2 мА/см2, 10% гель), а время и ток переноса можно регулировать в зависимости от молекулярной массы.
1) При ламинировании пленки, клея и бумажных сэндвичей работайте на большой пластине с вращающимся пленочным буфером.После укладки перенесите три на вращающееся пленочное устройство параллельно.Не перемещайте их больше, потому что возможность появления пузырей полностью исключена за счет работы в буфере, поэтому нет необходимости гонять пузыри.
2) О времени переноса пленки: 20 В для полусухого вращения × 30 мин.
(б) мокрый метод
Мы принципиально не используем этот метод, поэтому не будем его здесь приводить.
C выявление эффекта после метастазирования
1. Крашение клеем
После окрашивания Кумасси бриллиантовым синим и обесцвечивания Дестейном проверьте, остался ли на клее белок, отражающий эффект переноса.
2. Красящая пленка
Существует два вида растворов красителей: обратимые и необратимые.К обратимым относятся понсо красный, фастгрин ФЦ, КПЦ и др. после окрашивания этими красителями пигмент можно вымыть, а мембрану использовать для дальнейшего анализа.Но необратимые красители, такие как кумасси бриллиантовый синий, тушь, амидо черный 10В и др., и окрашенная пленка не могут быть использованы для дальнейшего анализа.
Время публикации: 09 сентября 2022 г.
