Usarpegamento de separación
uciones y problemas comunes:
1) El tamaño entre papel de filtro, pegamento y membrana es generalmente papel de filtro > = membrana > = pegamento.
2) No debe haber burbujas entre el papel de filtro, el pegamento y la membrana, lo que provocaría un cortocircuito.
3) Debido a la hidrofobicidad de la membrana, la membrana primero debe humedecerse completamente en metanol.Además, la película debe mantenerse húmeda en todo momento en la operación posterior (excepto en el método de película seca).
4) El papel de filtro se puede reutilizar.Hay muchas proteínas transferidas adsorbidas en el papel de filtro superior (membrana), por lo que los papeles de filtro superior e inferior no deben mezclarse.Si no se pueden distinguir, se puede reemplazar el papel de filtro de goma.
5) El tiempo de transferencia es generalmente de 1,5 horas (1ma-2ma/cm2, gel al 10 %), y el tiempo de transferencia y la corriente se pueden ajustar según el peso molecular.
1) Al laminar sándwiches de película, pegamento y papel, opere en una placa grande con un amortiguador de película giratorio.Después de apilar, transfiera los tres al dispositivo de película giratoria en paralelo.No los mueva más, porque la posibilidad de burbujas se ha eliminado por completo al operar en el búfer, por lo que no es necesario impulsar burbujas.
2) Acerca del tiempo de transferencia de la película: 20 V para rotación semiseca × 30 min
(b) método húmedo
Básicamente, no usamos este método, por lo que no lo presentaremos aquí.
C identificación del efecto después de la metástasis
1. Teñido con cola
Después de teñir con azul brillante de Coomassie y decolorar con Destain, vea si todavía hay proteína en el pegamento para reflejar el efecto de la transferencia.
2. Película de tinte
Hay dos tipos de soluciones de tinte, reversibles e irreversibles.Los reversibles incluyen ponceau-s red, fastgreen FC, CPT, etc. Después de teñir con estos tintes, el pigmento se puede lavar y la membrana se puede usar para análisis posteriores.Pero los tintes irreversibles, como el azul brillante de Coomassie, la tinta china, el amido Black 10B, etc., y la película teñida no se pueden usar para análisis posteriores.
Hora de publicación: 09-sep-2022
