使用分離膠
解決方案和常見問題:
1)濾紙、膠水、膜之間的大小一般為濾紙>=膜>=膠水。
2)濾紙、膠水和膜之間不能有氣泡,否則會造成短路。
3) 由於膜的疏水性,膜必須首先在甲醇中完全潤濕。此外,在後續操作中必須始終保持薄膜濕潤(乾膜法除外)。
4)濾紙可重複使用。上層濾紙(膜)吸附的轉運蛋白較多,因此上下層濾紙不能混用。如果無法區分,可以更換橡膠濾紙。
5)轉印時間一般為1.5小時,(1ma-2ma/cm2,10%凝膠),轉印時間和電流可根據分子量進行調整。
1)覆膜、膠水和紙夾層時,在帶有旋轉膠片緩衝器的大盤中操作。疊好後,將三者平行傳送至轉膜裝置。不要再動它們了,因為在buffer中操作已經完全消除了產生氣泡的可能性,所以不需要再驅動氣泡了
2)關於轉膜時間:半乾轉20V×30min
(二)濕法
這種方法我們基本不用,這裡就不介紹了。
C轉移後效果鑑定
1、膠染
考馬斯亮藍染色,Destain脫色後,看膠水上是否還有蛋白,反映轉印效果。
2、染膜
有兩種染料溶液,可逆的和不可逆的。可逆的有麗春紅、固綠FC、CPTs等,用這些染料染色後,色素可以洗掉,出膜可以做進一步分析。但不可逆染料,如考馬斯亮藍、印度墨水、氨基黑10B等,染色後的膠片不能用於進一步分析。
發佈時間:Sep-09-2022