Brugadskillelseslim
handlinger og almindelige problemer:
1) Størrelsen mellem filterpapir, lim og membran er generelt filterpapir > = membran > = lim.
2) Der må ikke være bobler mellem filterpapir, lim og membran, som vil forårsage kortslutning.
3) På grund af membranens hydrofobicitet skal membranen først fugtes fuldstændigt i methanol.Derudover skal filmen hele tiden holdes våd i den efterfølgende operation (undtagen tørfilmmetoden).
4) Filterpapiret kan genbruges.Der er mange overførte proteiner adsorberet i det øverste filterpapir (membran), så det øverste og nederste filterpapir må ikke blandes.Hvis de ikke kan skelnes, kan gummifilterpapiret udskiftes.
5) Overførselstiden er generelt 1,5 timer, (1ma-2ma / cm2, 10% gel), og overførselstiden og strømmen kan justeres i henhold til molekylvægten.
1) Ved laminering af film, lim og papirsandwich skal du arbejde i en stor plade med en roterende filmbuffer.Efter stabling overføres de tre parallelt til den roterende filmanordning.Flyt dem ikke mere, fordi muligheden for bobler er blevet fuldstændig elimineret ved at operere i bufferen, så der er ingen grund til at drive bobler
2) Om filmoverførselstid: 20 V for halvtør rotation × 30 min
b) våd metode
Vi bruger som udgangspunkt ikke denne metode, så vi vil ikke introducere den her.
C identifikation af effekt efter metastase
1. Limfarvning
Efter farvning med Coomassie brilliant blue og affarvning med Destain, se om der stadig er protein på limen for at afspejle effekten af overførsel.
2. Farvefilm
Der er to slags farvestofopløsninger, reversible og irreversible.De reversible omfatter ponceau-s red, fastgreen FC, CPT'er osv. efter farvning med disse farvestoffer kan pigmentet vaskes væk, og membranen kan bruges til yderligere analyse.Men irreversible farvestoffer, såsom Coomassie brilliant blue, India ink, amido Black 10B osv., og den farvede film kan ikke bruges til yderligere analyse.
Indlægstid: 09-09-2022
