Използвайтелепило за разделяне
проблеми и често срещани проблеми:
1) Размерът между филтърна хартия, лепило и мембрана обикновено е филтърна хартия > = мембрана > = лепило.
2) Не трябва да има мехурчета между филтърната хартия, лепилото и мембраната, които ще причинят късо съединение.
3) Поради хидрофобността на мембраната, мембраната трябва първо да бъде напълно намокрена с метанол.В допълнение, филмът трябва да се поддържа мокър през цялото време на последващата операция (с изключение на метода със сух филм).
4) Филтърната хартия може да се използва повторно.Има много прехвърлени протеини, адсорбирани в горната филтърна хартия (мембрана), така че горната и долната филтърна хартия не трябва да се смесват.Ако не могат да бъдат разграничени, гумената филтърна хартия може да се смени.
5) Времето за прехвърляне обикновено е 1,5 часа (1ma-2ma / cm2, 10% гел), а времето за прехвърляне и токът могат да се регулират според молекулното тегло.
1) Когато ламинирате филм, лепило и хартиени сандвичи, работете в голяма плоча с въртящ се филмов буфер.След подреждането прехвърлете трите успоредно на устройството за въртящо се фолио.Не ги местете повече, защото възможността за мехурчета е напълно елиминирана чрез работа в буфера, така че няма нужда да карате мехурчета
2) Относно времето за трансфер на филма: 20 V за полусухо въртене × 30 минути
б) мокър метод
По принцип не използваме този метод, така че няма да го представяме тук.
C идентифициране на ефекта след метастази
1. Боядисване с лепило
След оцветяване с Coomassie brilliant blue и обезцветяване с Destain, вижте дали все още има протеин върху лепилото, за да отразите ефекта от трансфера.
2. Багрилен филм
Има два вида багрилни разтвори, обратими и необратими.Обратимите включват Ponceau-s red, fastgreen FC, CPTs и т.н. след боядисване с тези багрила пигментът може да се отмие и мембраната може да се използва за допълнителен анализ.Но необратими багрила, като Coomassie brilliant blue, India ink, amido Black 10B и др., и оцветеният филм не могат да се използват за по-нататъшен анализ.
Време на публикуване: септември 09-2022 г
