Użukolla tas-separazzjoni
uzzjonijiet u problemi komuni:
1) Id-daqs bejn karta tal-filtru, kolla u membrana ġeneralment huwa karta tal-filtru > = membrana > = kolla.
2) M'għandux ikun hemm bżieżaq bejn karta tal-filtru, kolla u membrana, li se jikkawżaw short circuit.
3) Minħabba l-idrofobiċità tal-membrana, il-membrana għandha l-ewwel tkun imxarrba kompletament fil-metanol.Barra minn hekk, il-film għandu jinżamm imxarrab f'kull ħin fl-operazzjoni sussegwenti (ħlief għall-metodu tal-film niexef).
4) Il-karta tal-filtru tista 'terġa' tintuża.Hemm ħafna proteini trasferiti adsorbiti fil-karta tal-filtru ta 'fuq (membrana), għalhekk il-karti tal-filtru ta' fuq u t'isfel m'għandhomx jitħalltu.Jekk ma jistgħux jiġu distinti, il-karta tal-filtru tal-gomma tista 'tiġi sostitwita.
5) Il-ħin tat-trasferiment huwa ġeneralment 1.5 sigħat, (1ma-2ma / cm2, ġel 10%), u l-ħin tat-trasferiment u l-kurrent jistgħu jiġu aġġustati skond il-piż molekulari.
1) Meta l-laminazzjoni ta 'film, kolla u sandwiches tal-karti, topera fi pjanċa kbira b'buffer tal-film li jdur.Wara l-istivar, ittrasferixxi t-tlieta għall-apparat tal-film li jdur b'mod parallel.M'għadx iċċaqlaqhom, minħabba li l-possibbiltà ta 'bżieżaq ġiet eliminata kompletament billi topera fil-buffer, għalhekk m'hemmx għalfejn issuq bżieżaq
2) Dwar il-ħin tat-trasferiment tal-film: 20 V għal rotazzjoni semi niexfa × 30min
(b) metodu imxarrab
Bażikament ma nużawx dan il-metodu, għalhekk mhux se nintroduċuh hawn.
Ċ identifikazzjoni tal-effett wara metastasi
1. Żebgħa tal-kolla
Wara t-tbajja 'b'Coomassie blu brillanti u d-dekolorizzazzjoni b'Destin, ara jekk għadx hemm proteina fuq il-kolla biex tirrifletti l-effett tat-trasferiment.
2. Film taż-żebgħa
Hemm żewġ tipi ta 'soluzzjonijiet taż-żebgħa, riversibbli u irriversibbli.Dawk riversibbli jinkludu ponceau-s aħmar, fastgreen FC, CPTs, eċċ wara ż-żebgħa b'dawn iż-żebgħa, il-pigment jista 'jinħasel, u l-membrana tista' tintuża għal aktar analiżi.Iżda żebgħa irriversibbli, bħal Coomassie brillanti blu, linka tal-Indja, amido Black 10B, eċċ., U l-film imtebba ma jistgħux jintużaw għal aktar analiżi.
Ħin tal-post: 09-Settembru 2022