उपयोगजुदाई गोंद
विचार और आम समस्याएं:
1) फिल्टर पेपर, गोंद और झिल्ली के बीच का आकार आमतौर पर फिल्टर पेपर> = झिल्ली> = गोंद होता है।
2) फिल्टर पेपर, गोंद और झिल्ली के बीच कोई बुलबुला नहीं होना चाहिए, जिससे शॉर्ट सर्किट हो जाएगा।
3) झिल्ली की हाइड्रोफोबिसिटी के कारण, झिल्ली को पहले मेथनॉल में पूरी तरह गीला होना चाहिए।इसके अलावा, बाद के ऑपरेशन में फिल्म को हर समय गीला रखना चाहिए (शुष्क फिल्म विधि को छोड़कर)।
4) फिल्टर पेपर का पुन: उपयोग किया जा सकता है।ऊपरी फिल्टर पेपर (झिल्ली) में कई स्थानांतरित प्रोटीन सोखे जाते हैं, इसलिए ऊपरी और निचले फिल्टर पेपर को मिश्रित नहीं किया जाना चाहिए।यदि उन्हें अलग नहीं किया जा सकता है, तो रबर फिल्टर पेपर को बदला जा सकता है।
5) स्थानांतरण का समय आम तौर पर 1.5 घंटे, (1ma-2ma / cm2, 10% जेल) होता है, और स्थानांतरण समय और वर्तमान को आणविक भार के अनुसार समायोजित किया जा सकता है।
1) फिल्म, ग्लू और पेपर सैंडविच को लेमिनेट करते समय, रोटेटिंग फिल्म बफर के साथ एक बड़ी प्लेट में काम करें।स्टैकिंग के बाद, तीनों को समानांतर में घूमने वाली फिल्म डिवाइस में स्थानांतरित करें।उन्हें और अधिक स्थानांतरित न करें, क्योंकि बफर में संचालन से बुलबुले की संभावना पूरी तरह से समाप्त हो गई है, इसलिए बुलबुले चलाने की कोई आवश्यकता नहीं है
2) फिल्म स्थानांतरण समय के बारे में: अर्ध शुष्क रोटेशन × 30 मिनट के लिए 20 वी
(बी) गीली विधि
हम मूल रूप से इस पद्धति का उपयोग नहीं करते हैं, इसलिए हम इसे यहां पेश नहीं करेंगे।
सी मेटास्टेसिस के बाद प्रभाव की पहचान
1. गोंद रंगाई
Coomassie शानदार नीले रंग के साथ धुंधला होने और Destain के साथ रंग हटाने के बाद, देखें कि स्थानांतरण के प्रभाव को प्रतिबिंबित करने के लिए गोंद पर अभी भी प्रोटीन है या नहीं।
2. डाई फिल्म
दो प्रकार के डाई समाधान, प्रतिवर्ती और अपरिवर्तनीय हैं।प्रतिवर्ती रंगों में पोंसेउ-एस रेड, फास्टग्रीन एफसी, सीपीटी आदि शामिल हैं। इन रंगों से रंगने के बाद वर्णक को धोया जा सकता है, और झिल्ली को आगे के विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।लेकिन अपरिवर्तनीय रंजक, जैसे Coomassie शानदार नीला, भारत स्याही, एमिडो ब्लैक 10B, आदि, और दाग वाली फिल्म का उपयोग आगे के विश्लेषण के लिए नहीं किया जा सकता है।
पोस्ट करने का समय: सितम्बर-09-2022
